真核細胞依賴于多種途徑的膜循環(huán)，比如溶質(zhì)分泌、營養(yǎng)吸收或膜蛋白周轉(zhuǎn)。每個途徑都使用幾種類型的細胞器，從質(zhì)膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體到回收中間體，如載體或運輸囊泡。如何確定在給定途徑中起作用的不同細胞器和回收中間體的類別是一項復雜的任務。并且不同細胞器的循環(huán)膜和蛋白質(zhì)標記物也需要同時識別。

為了解決上述問題，通常的做法是采用熒光團標記回收細胞器的膜并使用免疫染色技術(shù)來揭示同一細胞器上的蛋白質(zhì)標記。但是由于探針容易從它們的目標細胞器中丟失，甚至可能被困在其他結(jié)構(gòu)中，例如線粒體。同時，由于大量的轉(zhuǎn)運細胞器彼此非常接近，這使得傳統(tǒng)的衍射顯微鏡難以區(qū)分它們。

為了克服這些限制，一種新型膜探針被開發(fā)出來，稱為膜結(jié)合熒光團-半胱氨酸-賴氨酸-棕櫚酰基團membrane-binding fluorophore-cysteine-lysine-palmitoyl group (mCLING)，這種新型mCLING探針，由一個八肽組成，包括一個半胱氨酸和七個賴氨酸，其中一個與棕櫚酰尾相連，它的分子量為 2,056D，包括 Atto647N部分。馬來酰亞胺基團將半胱氨酸橋接到熒光團。

mCLING探針能標記質(zhì)膜并在內(nèi)吞過程中被吸收。它在固定和透化后仍然附著在膜上，因此可以與免疫染色和超分辨率顯微鏡結(jié)合使用。 mCLING已經(jīng)得到驗證的應用包括哺乳動物培養(yǎng)的細胞、酵母、細菌、原代培養(yǎng)的神經(jīng)元、黑腹果蠅幼蟲神經(jīng)肌肉接頭和哺乳動物組織。mCLING使我們能夠研究不同運輸細胞器的分子組成。

mCLING的標記模式與活細胞中 FM染料的標記模式相同，證實該探針確實報告了內(nèi)吞作用。此外，mCLING對細胞沒有毒性作用。

在 mCLING存在下，我們將這些配體應用于培養(yǎng)中的COS7細胞。實時熒光成像顯示幾乎所有含有配體的細胞器均被 mCLING 標記。重要的是，mCLING的存在不會干擾COS7細胞中的膜運輸。例如，轉(zhuǎn)鐵蛋白攝取量不受mCLING的影響；它的回收和釋放也不受影響。

如圖，mCLING揭示了海馬神經(jīng)元中主動循環(huán)和自發(fā)循環(huán)突觸小泡之間蛋白質(zhì)組成的差異。

IHC 細胞器的多色免疫染色分析

mCLING探針技術(shù)，可用于標記質(zhì)膜并跟蹤內(nèi)吞細胞器。與大多數(shù)用于膜標記的市售染料不同，mCLING可以輕松地與固定和免疫染色結(jié)合用于細胞培養(yǎng)和組織中。此外，據(jù)我們所知，mCLING是唯一可用于揭示微小內(nèi)吞細胞器形態(tài)和身份的熒光探針。此外，超高分辨率顯像也是mCLING探針一大優(yōu)勢。

艾美捷科技作為專業(yè)的神經(jīng)抗體和神經(jīng)突觸領(lǐng)域解決方案供應商，為您推薦Synaptic Systems品牌的mCLING特色產(chǎn)品，助你發(fā)表多篇高分文章。

作為一家具有高端的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)，總部位于武漢光谷高新技術(shù)開發(fā)區(qū)，服務面向全國。艾美捷科技是集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品、整合的解決方案，及優(yōu)質(zhì)的物流服務。為了更好的服務客戶，公司組建了一支經(jīng)驗豐富的研發(fā)團隊-艾美捷生物技術(shù)中心，進入研發(fā)生產(chǎn)階段，將更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品推薦給國內(nèi)生物領(lǐng)域的同仁們!

艾美捷科技與國內(nèi)外優(yōu)秀的生物試劑供應商優(yōu)保持著密切的合作關(guān)系，目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理，主要包括：AmyJet、AAT Bioquest、Abbexa、Abnova、Agrisera、Anogen、Atlas Antibodies、Biosensis、Biovision、BioVendor、Caisson Labs、Cell Biolabs、Cytoskeleton、Demeditec、Duchefa、Epigentek、Equitech-Bio、EXBio、Fitzgerald、GeneCopoeia、Hycult Biotech、ImmunoReagents、ImmunoStep、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、Lumiprobe、Mabtech、Matreya、Norgen Biotek、Origene、ProImmune、ProSpec、ScyTek、Solis BioDyne、SouthernBiotech、StressMarq、SySy、US Biological、TRC等，可以在短時間內(nèi)為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品及物流服務。