MMP-19檢測(cè)試劑盒是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA），用于定量檢測(cè)倉(cāng)鼠（CHO）細(xì)胞樣本中的基質(zhì)金屬蛋白酶19（Matrix Metalloproteinase 19，MMP-19）。僅供研究使用，不得用于診斷程序。

艾美捷CHO MMP-19 ELISA試劑盒【#41-M19HA-E01】檢測(cè)原理：

雙抗體夾心ELISA的原理如圖1所示。在此檢測(cè)中，樣本中的MMP-19與已吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗MMP-19抗體發(fā)生反應(yīng)。經(jīng)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入檢測(cè)抗體（生物素偶聯(lián)的抗MMP-19抗體），形成復(fù)合物。洗滌后，加入辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的鏈霉親和素，形成復(fù)合物。再經(jīng)洗滌后，通過加入顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來測(cè)定復(fù)合物。結(jié)合的酶量與樣本中MMP-19的濃度成正比；因此，450 nm處的吸光度是測(cè)試樣本中MMP-19濃度的量度。可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線（由標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建）來估算測(cè)試樣本中MMP-19的量，并根據(jù)樣本稀釋情況進(jìn)行校正。

程序限制：

僅供研究使用：不得用于診斷程序。

可靠性和重復(fù)性：當(dāng)完全理解包裝說明書中的信息并遵循良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范時(shí)，可以獲得可靠和可重復(fù)的結(jié)果。可能影響檢測(cè)性能的因素包括儀器功能、玻璃器皿的清潔度、蒸餾水或去離子水的質(zhì)量、試劑和樣本的移液準(zhǔn)確性、洗滌技術(shù)以及孵育時(shí)間和溫度。不要將不同批次或來源的試劑混合或替換使用。

所需材料（未提供）：

精密移液管（2 ?L至1000 ?L），用于制備和分裝稀釋液

試管

噴壺或微孔板清洗/吸引器

蒸餾水或去離子水

能在450 nm處讀數(shù)的微孔板讀數(shù)儀

用于制備試劑和緩沖液溶液的各種玻璃器皿

用于樣本收集的離心機(jī)

用于血漿收集的抗凝劑

計(jì)時(shí)器

微孔板振蕩器

樣本采集與處理：

所有生物材料應(yīng)被視為潛在危險(xiǎn)品。在處理和丟棄時(shí)應(yīng)遵循通用預(yù)防措施。

已知干擾物質(zhì)：濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會(huì)抑制酶反應(yīng)。

樣本稀釋：

檢測(cè)要求每個(gè)測(cè)試樣本在使用前進(jìn)行稀釋。每次進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，所有樣本都應(yīng)進(jìn)行雙份檢測(cè)。推薦的稀釋倍數(shù)僅為建議。稀釋倍數(shù)應(yīng)基于未知樣本的預(yù)期濃度，使得稀釋后的樣本落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣本水平，在運(yùn)行整個(gè)板之前，強(qiáng)烈建議對(duì)一個(gè)或兩個(gè)代表性樣本進(jìn)行系列稀釋。

CHO培養(yǎng)上清液或提取樣本：推薦起始稀釋倍數(shù)為1:80。要制備樣本的1:80稀釋液，將5 ?L樣本轉(zhuǎn)移至395 ?L的1X稀釋液中。充分混合。

結(jié)果計(jì)算：

從所有孔的測(cè)試值中減去平均背景值（標(biāo)準(zhǔn)零的平均吸光度讀數(shù)）。

對(duì)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的重復(fù)讀數(shù)取平均值，并使用結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來處理數(shù)據(jù)，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。也可以使用二階多項(xiàng)式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們將提供數(shù)據(jù)的擬合精度較低。

從標(biāo)準(zhǔn)曲線上估算測(cè)試樣本值。根據(jù)稀釋因子進(jìn)行校正，以得出原始樣本中MMP-19的濃度。