熒光素酶（Luciferase）是一類能夠催化發(fā)光反應(yīng)的氧化酶的總稱，這一過程被稱為生物發(fā)光。螢火蟲熒光素酶在報告細胞中表達，催化D-熒光素轉(zhuǎn)化為氧熒光素，同時使用ATP作為共底物，并在Mg??存在下產(chǎn)生發(fā)光。發(fā)光的量與反應(yīng)中存在的熒光素酶量成正比，發(fā)光量通過發(fā)光檢測儀讀取。

BPS bioscience的一步法熒光素酶測定系統(tǒng)旨在用于高通量、靈敏地定量檢測哺乳動物細胞培養(yǎng)中的螢火蟲熒光素酶活性。該試劑由兩個組分構(gòu)成，即熒光素酶試劑緩沖液（組分A）和熒光素酶試劑底物（組分B）。組分A和組分B混合后形成工作溶液，其中包含了細胞裂解和熒光素酶定量所需的所有必需試劑。

操作步驟：

1. 將熒光素酶試劑緩沖液（組分A）在室溫水浴中解凍，使用前平衡至室溫并充分混合。

2. 計算實驗所需的熒光素酶試劑量（組分A + 組分B）。立即在實驗前，將熒光素酶試劑底物（組分B）以1:100的比例稀釋到熒光素酶試劑緩沖液（組分A）中，并充分混合。避免暴露于過多光線。

3. 從培養(yǎng)箱中取出含有表達熒光素酶的細胞板。注意：板必須與所使用的發(fā)光檢測儀兼容。

4. 將熒光素酶測定工作溶液（組分A + 組分B）直接添加到培養(yǎng)基中，體積與培養(yǎng)基體積相等。例如，96孔板中每孔含有100ul培養(yǎng)基，則需加入100ul/孔的工作溶液。

5. 在室溫下輕輕搖動板至少15分鐘。使用發(fā)光檢測儀測量熒光素酶活性。在此條件下，信號在室溫下可穩(wěn)定超過兩小時。為獲得最大光強度，建議在添加試劑后1小時內(nèi)測量樣品。

實驗結(jié)果

BPS bioscience的一步法熒光素酶測定系統(tǒng)（左）與其他品牌的熒光素酶試劑（右）的比較：JAK/STAT信號通路ISRE報告基因HEK293細胞（BPS Bioscience #60510）被種植在96孔板中，并用IFNα處理或不用IFNα處理以激活JAK/STAT信號通路。第二天，向細胞中添加熒光素酶試劑，并在試劑添加后15分鐘測量發(fā)光。數(shù)據(jù)以背景減去后的發(fā)光值表示。

BPS bioscience的一步法熒光素酶測定系統(tǒng)在熒光素酶報告細胞中產(chǎn)生明亮且穩(wěn)定的發(fā)光，可持續(xù)數(shù)小時。JAK/STAT信號通路ISRE報告基因HEK293細胞（BPS Bioscience #60510）被種植在96孔板中，并用IFNα處理或不用IFNα處理。第二天，向細胞中添加熒光素酶試劑，并在試劑添加后5分鐘至2小時內(nèi)測量發(fā)光。數(shù)據(jù)以背景減去后的發(fā)光值表示。