心肌肌球蛋白是從牛心組織中純化的（1, 2）。完整的肌球蛋白包括其必需輕鏈（ELC）和調(diào)節(jié)輕鏈（RLC）被純化，詳見(jiàn)圖1和圖2。隨后，肌球蛋白通過(guò)α-胰蛋白酶消化，釋放出可溶性的亞片段-1（S1）結(jié)構(gòu)域，并通過(guò)離心分離（3）。純化的肌球蛋白S1片段已在F-肌動(dòng)蛋白激活的ATP酶活性測(cè)定中被證實(shí)具有生物學(xué)活性（見(jiàn)生物學(xué)活性測(cè)定）。牛心肌肌球蛋白S1片段以白色凍干粉形式提供。

圖1. 肌球蛋白蛋白及其亞片段的示意圖

圖例：肌球蛋白是一種由兩條重鏈和兩條輕鏈組成的六聚體蛋白。在鎂存在的情況下，肌球蛋白可以通過(guò)α-胰蛋白酶被蛋白酶解為重鏈肌球蛋白（HMM）和輕鏈肌球蛋白（LMM）。然而，在EDTA存在的情況下，α-胰蛋白酶會(huì)產(chǎn)生可溶性的肌球蛋白S1片段（3）。

圖2. 完整肌球蛋白和S1肌球蛋白

將20微克的完整牛心肌球蛋白（泳道A）和相應(yīng)的S1肌球蛋白（泳道B）通過(guò)4-20% SDS-PAGE凝膠電泳分離，并用考馬斯亮藍(lán)染色。箭頭表示肌球蛋白重鏈（約200 kDa），箭頭表示調(diào)節(jié)輕鏈（約20 kDa）和兩種必需輕鏈同工型（約25 kDa和21 kDa）。蛋白定量采用Precision Red?蛋白測(cè)定試劑（貨號(hào)：ADV02）進(jìn)行。Mark12分子量標(biāo)記來(lái)自Invitrogen。

艾美捷肌球蛋白S1片段(心臟),牛心臟（#CS-MYS03）用途：

1. 測(cè)量鈣激活的肌球蛋白ATP酶活性，當(dāng)其與細(xì)絲結(jié)合時(shí)。  

2. 識(shí)別/表征影響TT復(fù)合物調(diào)節(jié)和肌球蛋白ATP酶活性的蛋白質(zhì)或小分子。  

3. 識(shí)別/表征影響肌球蛋白/F-肌動(dòng)蛋白相互作用的蛋白質(zhì)或小分子。

儲(chǔ)存與復(fù)溶

短暫離心以使產(chǎn)品聚集在管底。用300微升Milli-Q水復(fù)溶1毫克的MYS03（10毫克瓶用3毫升）將產(chǎn)生濃度為3.3毫克/毫升的心肌S1肌球蛋白溶液，其緩沖液組成為：20 mM PIPES，pH 7.0，5%（質(zhì)量/體積）蔗糖和1%（質(zhì)量/體積）葡聚糖。該蛋白應(yīng)避免反復(fù)凍融。凍干蛋白在4°C干燥條件下（濕度<10%）可穩(wěn)定保存1年。

純度

通過(guò)掃描密度法對(duì)4-20%梯度聚丙烯酰胺凝膠上考馬斯亮藍(lán)染色的蛋白進(jìn)行分析，確定用于產(chǎn)生肌球蛋白S1片段的肌球蛋白及其輕鏈的純度為90%（見(jiàn)圖2）。

生物學(xué)活性測(cè)定 ：

牛心肌球蛋白S1片段的生物學(xué)活性可通過(guò)其F-肌動(dòng)蛋白激活的ATP水解速率來(lái)確定。測(cè)定方法是先將肌動(dòng)蛋白聚合形成F-肌動(dòng)蛋白，然后將心肌原肌球蛋白/原肌鈣蛋白復(fù)合物（TT復(fù)合物）與肌動(dòng)蛋白絲按化學(xué)計(jì)量比混合。這會(huì)形成類(lèi)似肌肉纖維細(xì)絲的包被絲。肌球蛋白以亞化學(xué)計(jì)量比加入，并用ATP和鈣啟動(dòng)反應(yīng)。嚴(yán)格的質(zhì)量控制確保在缺乏鈣的情況下，TT復(fù)合物完全抑制肌球蛋白ATP酶活性。加入10微摩爾鈣后，肌球蛋白ATP酶活性將恢復(fù)。鈣與原肌鈣蛋白C結(jié)合，使其從F-肌動(dòng)蛋白上解離，從而使肌球蛋白能夠結(jié)合。

試劑

1. 心肌TT復(fù)合物（1×1毫克，貨號(hào)：TT05）  

2. 心肌肌球蛋白S1（0.25毫克），貨號(hào)：MYS03）  

3. 心肌肌動(dòng)蛋白（1毫克，貨號(hào)：AD99-A）  

4. ATP酶活性生化試劑盒（貨號(hào)：BK051）  

5. 100 mM ATP，溶于50 mM Tris-HCl，pH 7.5（100微升）  

6. 1 M二硫蘇糖醇，溶于水（100微升）  

7. PM12反應(yīng)緩沖液（12 mM PIPES-KOH，pH 7.0，2 mM MgCl?）  

8. 500 mM EGTA-Na，pH 8.0

肌球蛋白S1片段(心臟),牛心臟文獻(xiàn)參考：

1. Pollard, T.D., . 1982. Methods in Cell Biol. 24:333

2. Margossian, S.S., and Lowey, S. 1982. Methods in Enzymology.85:55-71.

3. Weeds, A.G., and Taylor, R.S. 1975. Nature (London) 257:54.

4. M.J. Holroyde et al. 1980. The calcium and magnesium binding sites on cardiac troponin their role in the regulation of myofibrillar adenosine triphosphatase.