Hypoxyprobe?-1 Plus試劑盒組分的詳細(xì)描述

1) Hypoxyprobe?-1是一種取代的2-硝基咪唑，其化學(xué)名稱為pimonidazole鹽酸鹽，分子量為290.8；水溶性為400毫摩爾（116毫克/毫升）；在324納米處有紫外吸收（在0.9%的鹽水中消光系數(shù)為7020）。其游離堿pimonidazole的分子量為254.3，pKa值為8.7，辛醇水分配系數(shù)為8.5。

固體Hypoxyprobe?-1在室溫下昏暗光線中儲(chǔ)存兩年，以及在4°C下0.9%的鹽水（100克/升）中儲(chǔ)存4.5年，通過紫外和HPLC分析未檢測(cè)到降解。

Pimonidazole在缺氧細(xì)胞中通過還原激活，并與蛋白質(zhì)、肽和氨基酸中的巰基（硫醇）基團(tuán)形成穩(wěn)定的加合物。FITC-MAb1與這些加合物結(jié)合，允許通過免疫化學(xué)方法檢測(cè)它們。

2) FITC-MAb1是一種熒光素結(jié)合的抗pimonidazole、大鼠IgG1單克隆抗體（MAb克隆11.23.22.R），在含有0.09% proclin作為穩(wěn)定劑的PBS中供應(yīng)，濃度為0.5毫克/毫升。感興趣的組織可以通過免疫組化在冷凍固定切片或甲醛固定的石蠟包埋切片上進(jìn)行研究，或在組織解離后的流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行研究。

注意：FITC-MAb1與pimonidazole的蛋白質(zhì)、肽和氨基酸加合物結(jié)合，但在免疫組化過程中的組織處理會(huì)洗去肽和氨基酸加合物，因此免疫組化缺氧檢測(cè)依賴于缺氧組織中pimonidazole的蛋白質(zhì)加合物。

3) 顯色抗FITC二抗試劑是為Hypoxyprobe公司準(zhǔn)備的親和純化的兔IgG多克隆抗染料蛋白結(jié)合辣根過氧化物酶。過氧化物酶結(jié)合的抗FITC二抗協(xié)議提供了強(qiáng)烈的免疫染色，并且與甲醛固定的石蠟包埋的大鼠腫瘤組織中存在的任何自然綠色熒光蛋白的背景信號(hào)非常低。

作為Hypoxyprobe在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Hypoxyprobe熱銷產(chǎn)品Hypoxyprobe Plus試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Hypoxyprobe Plus試劑盒：

應(yīng)用：通過免疫熒光、免疫過氧化物酶或流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞和組織缺氧的免疫化學(xué)檢測(cè)。當(dāng)Hypoxyprobe?-1 Plus試劑盒與抗FITC二抗試劑結(jié)合使用時(shí)，在大鼠組織中自然綠色熒光蛋白（通常會(huì)干擾缺氧信號(hào)）的背景信號(hào)非常低。

數(shù)量：a. 3種不同規(guī)格的Hypoxyprobe?-1 Plus試劑盒分別包含100毫克、200毫克或1000毫克的pimonidazole HCl。每公斤體重60毫克的劑量足以用于動(dòng)物研究。

b. 3種不同規(guī)格的Hypoxyprobe?-1 Plus試劑盒還包括一盒（100毫克和200毫克試劑盒）或兩盒（1000毫克試劑盒），每盒含有200微升的抗pimonidazole、FITC結(jié)合的IgG1大鼠單克隆抗體（克隆11.23.22.R）。每個(gè)小瓶含有200微升的0.50毫克/毫升的FITC-MAb1溶液，溶于含有1%牛血清白蛋白和0.09%疊氮化鈉的PBS中。FITC-MAb1的最佳稀釋度由研究者確定，但發(fā)現(xiàn)1:50-100的稀釋度在與1:50-100稀釋度的過氧化物酶結(jié)合抗FITC二抗試劑結(jié)合時(shí)，在大鼠腫瘤組織中給出強(qiáng)烈的免疫染色。雖然FITC-MAb1并非專為免疫熒光設(shè)計(jì)，但可以用于此目的。通常免疫熒光的抗體稀釋度比免疫過氧化物酶檢測(cè)要低。

不提供：用于免疫組化分析的標(biāo)準(zhǔn)試劑。

儲(chǔ)存：a. 將Hypoxyprobe?-1固體存放在室溫下的暗處（也可以存放在2-8攝氏度）。

b. 將FITC-MAb1和HRP結(jié)合的兔抗FITC存放在2-8攝氏度的暗處。不要冷凍。

測(cè)定說明：

1. 對(duì)正常或腫瘤組織缺氧的研究始于靜脈輸注、腹腔注射或口服Hypoxyprobe?-1（pimonidazole HCl）溶液，劑量為每公斤體重60毫克。對(duì)于一只25克的大鼠，這相當(dāng)于每只大鼠1.5毫克。在小鼠中已使用高達(dá)每公斤體重400毫克的劑量，未檢測(cè)到毒性或組織缺氧的變化，但每公斤體重60毫克可在最低成本下獲得良好的免疫染色。

Hypoxyprobe?-1在鹽水中的溶解度為116毫克/毫升，因此可以使用非常小的體積來施用Hypoxyprobe?-1。注射或攝取后，pimonidazole分布到所有組織，包括大腦，但它僅與那些氧氣濃度低于14微摩爾的細(xì)胞中的含巰基蛋白質(zhì)形成加合物——相當(dāng)于在37°C時(shí)的氧分壓pO2 = 10毫米汞柱。除了腫瘤，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚也擁有pO2 = 10毫米汞柱或更低的細(xì)胞。這些正常組織會(huì)結(jié)合Hypoxyprobe?-1。

小鼠體內(nèi)Hypoxyprobe?-1的血漿半衰期大約為25分鐘（有關(guān)參考文獻(xiàn)，請(qǐng)參閱www.hypoxyprobe.com上的FAQ鏈接）。相比之下，大鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘，人類為300分鐘。感興趣的大鼠組織可在Hypoxyprobe?-1給藥后15至90分鐘內(nèi)收獲。收獲時(shí)組織中的Hypoxyprobe?-1將在組織缺氧時(shí)結(jié)合，但與組織在15至90分鐘實(shí)驗(yàn)過程中暴露的量相比，殘留的Hypoxyprobe?-1的量非常小，因此由于殘留的Hypoxyprobe?-1引起的任何非特異性結(jié)合都是不可檢測(cè)的。

除了動(dòng)物研究，Hypoxyprobe?試劑盒還可用于組織培養(yǎng)中的細(xì)胞的Applications鏈接。通常，細(xì)胞懸浮液在缺氧條件下與100至200微摩爾的Hypoxyprobe?-1一起孵育1至2小時(shí)。通過細(xì)胞旋轉(zhuǎn)收獲細(xì)胞，固定并用FITC-MAb1和抗FITC顯色二抗試劑進(jìn)行免疫染色。

圖.福爾馬林固定的吡嘧達(dá)唑結(jié)合的免疫過氧化物酶染色

使用1:100稀釋度的FITCMAb1和1:100稀釋的辣根過氧化物酶偶聯(lián)的兔抗FITC IgG從嚙齒動(dòng)物腫瘤中切下石蠟包埋組織切片。

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）專注于研發(fā)非侵略性的缺氧標(biāo)志物（Hypoxia maker）和缺氧依賴性的細(xì)胞因子，所有產(chǎn)品皆基于Pimonidazole核心結(jié)構(gòu)來開發(fā)。 使用Pimonidazole HCl作為缺氧標(biāo)記物，廣泛用在狗、大小鼠。缺氧探針試劑盒核心組分為：缺氧探針（Pimonidazole 或CCI-103F）和缺氧探針的抗體。不同試劑盒中的探針和抗體標(biāo)記不同（可應(yīng)用于免疫熒光（IF），免疫組化（IHC），WB或流式細(xì)胞分析（FC））

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。