Hypoxyprobe?-F6試劑盒組分的詳細說明

1) Hypoxyprobe?-F6（CCI-103F）是一種六氟化2-硝基咪唑，具有六個磁等價的氟原子；分子量為337.2；水溶性為5.3毫摩爾，相當于1.8毫克/毫升。CCI-103F通常以10%二甲基亞砜/花生油混合物的形式腹腔注射（Ljungkvist等人，國際放射腫瘤學、生物學、物理學雜志。62(4): 1157-1168, 2005）。CCI-103F在昏暗光線下儲存時非常穩(wěn)定。

在缺氧細胞中，CCI-103F通過還原激活。激活的中間體與蛋白質(zhì)、肽和氨基酸中的巰基（硫醇）基團形成穩(wěn)定的共價加合物。初級抗CCI-103F抗血清與這些加合物結合，允許通過免疫化學方法檢測它們。有關作用機制和關于Hypoxyprobe?標記物使用的常見問題（FAQ），請參閱www.hypoxyprobe.com。

2) 抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6）與還原激活的CCI-103F的蛋白質(zhì)加合物結合，并作為稀釋的兔抗血清供應，含有0.09%的疊氮化鈉和1%的牛血清白蛋白作為穩(wěn)定劑。感興趣的組織可以通過免疫組化在甲醛固定的石蠟包埋切片或冷凍固定切片上進行研究，通過組織解離后的流式細胞術，或通過西方印跡法進行研究。抗CCI-103F抗血清與CCI103F的蛋白質(zhì)、肽和氨基酸加合物結合，但組織處理以準備免疫組化測定時會洗去肽和氨基酸加合物，因此免疫組化檢測僅依賴于缺氧組織中CCI103F的蛋白質(zhì)加合物。

在甲醛固定的石蠟包埋組織切片上進行免疫過氧化物酶分析，涉及將組織切片與大約1:500稀釋的抗CCI-103F抗血清100微升孵育。然后應用顯色劑山羊抗兔二抗以顯示缺氧標記物加合物的分布。下面提供了一個詳細的免疫過氧化物酶協(xié)議作為一般指南，但強調(diào)Hypoxyprobe?技術是穩(wěn)健的，鼓勵研究者自行修改。請參閱Ljungkvist等人，國際放射腫瘤學、生物學、物理學雜志。62(4): 1157-1168, 2005及其中引用的有關冷凍切片的研究。

作為Hypoxyprobe在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦Hypoxyprobe熱銷產(chǎn)品Hypoxyprobe-F6試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Hypoxyprobe-F6試劑盒：

應用：使用Hypoxyprobe?-F6試劑盒通過免疫化學檢測方法，包括免疫過氧化物酶、免疫熒光或流式細胞術來測量組織和細胞中的缺氧情況。（Kleiter等人，國際放射腫瘤學、生物學、物理學雜志。64(2): 592-602, 2006。Ljungkvist等人，國際放射腫瘤學、生物學、物理學雜志。62(4): 1157-1168, 2005）。

數(shù)量：a. Hypoxyprobe?-F6試劑盒分別包含100、200或1000毫克的CCI-103F（Hypoxyprobe?-F6）。在小動物研究中通常使用的劑量是每公斤體重60毫克。

b. 每個試劑盒包含稀釋后的抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6），其中含有0.09%的疊氮化鈉和1%的牛血清白蛋白作為穩(wěn)定劑。100毫克和200毫克的試劑盒各含有一個200微升單位的抗血清；1000毫克的試劑盒含有兩個200微升單位的抗血清。抗血清的最佳工作稀釋度應由研究者確定，但1/200至1/500的稀釋度在與過氧化物酶標記的山羊抗兔二抗結合時能給出強烈的免疫過氧化物酶染色。

不提供：抗兔二抗試劑或其他免疫組化試劑（緩沖液、抗原修復劑等）。

儲存：a. 將Hypoxyprobe?-F6儲存在室溫下的暗處（也可以儲存在2-8攝氏度）。

b. 將兔抗血清（PAbF6）儲存在2-8攝氏度。

測定說明

嚙齒動物的標記物研究始于將CCI-103F溶解在10%二甲基亞砜/90%花生油中，通過靜脈或腹腔注射（見Ljungkvist等人，國際放射腫瘤學、生物學、物理學雜志。62(4): 1157-1168, 2005），劑量為每公斤體重60毫克。60至120分鐘后，收獲感興趣的組織。CCI-103F的劑量為每公斤體重60毫克，從摩爾基礎上看比Hypoxyprobe公司提供的另一種缺氧標記物pimonidazole HCl的劑量要低，但這被CCI-103F更長的血漿半衰期所補償（t1/2 = 90分鐘，而小鼠中pimonidazole為25分鐘）。

注射后，Hypoxyprobe?標記物分布到所有組織，但僅在氧氣濃度低于14微摩爾的細胞中與含巰基的蛋白質(zhì)、肽和氨基酸形成加合物——相當于在37°C時的氧分壓pO2 = 10毫米汞柱。正常組織如肝臟、腎臟和皮膚擁有pO2為10毫米汞柱或更低的細胞，這些組織將結合Hypoxyprobe?標記物。在收獲時組織中殘留的未結合Hypoxyprobe?標記物將在組織缺氧時被激活并結合。然而，與典型實驗過程中組織暴露的量相比，殘留的Hypoxyprobe?標記物濃度非常小，因此在組織收獲時任何由殘留Hypoxyprobe?標記物引起的非特異性結合都是不可檢測的。

圖.相鄰組織切片中CCI-103F結合（F6，右圖）與吡莫硝唑結合（Pimo，左圖）的比較來自福爾馬林固定、石蠟包埋的犬腫瘤活檢。免疫過氧化物酶數(shù)據(jù)顯示，F(xiàn)6結合與那是吡莫硝唑。F6和吡莫硝唑加合物的兔抗血清沒有交叉反應。這允許獨立兩種標記物結合的測量（參見Kleiter等人，Int.J.Radiation Oncol.Biol.Phys.64（2）:592-6022006）。

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）專注于研發(fā)非侵略性的缺氧標志物（Hypoxia maker）和缺氧依賴性的細胞因子，所有產(chǎn)品皆基于Pimonidazole核心結構來開發(fā)。 使用Pimonidazole HCl作為缺氧標記物，廣泛用在狗、大小鼠。缺氧探針試劑盒核心組分為：缺氧探針（Pimonidazole 或CCI-103F）和缺氧探針的抗體。不同試劑盒中的探針和抗體標記不同（可應用于免疫熒光（IF），免疫組化（IHC），WB或流式細胞分析（FC））

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