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QA-Bio-Orela O-連接甘氨酸釋放試劑盒包括進(jìn)行多達(dá)12個糖蛋白樣品的O-連接去糖基化的試劑和材料,這些樣品可以并行分析,或者分為兩組,每組6個樣品,通常每個樣品的糖蛋白量高達(dá)1毫克。這種O-糖鏈釋放方法顯著減少了剝離現(xiàn)象,并減少了釋放前的樣品處理步驟。
專為QC實驗室設(shè)計的簡單O-連接去糖基化。
直接且簡單的方法。
釋放的糖鏈具有自由還原末端,適合在HPLC和MS分析前進(jìn)行熒光標(biāo)記。
熒光標(biāo)記允許通過HPLC對糖鏈物種進(jìn)行相對定量。
比水合肼法(LL-HYDRAZ-A2)更快、成本更低。
不需要特殊的處理技巧。
Orela反應(yīng):
Orela試劑在糖鏈與肽主鏈之間的連接處反應(yīng),將糖鏈作為糖基胺釋放。酸不穩(wěn)定的糖基胺衍生物被水解,產(chǎn)生自由的糖鏈。

艾美捷QA-Bio-QA-Bio-Orela O-連接甘氨酸釋放試劑盒(LL-ORELA-A2)內(nèi)容:
Part # Item Quantity
LL-ORELAREAGENT-0 Orela Release Reagent 2 x 3ml
LL-ACETIC-50P-01 Acetic Acid Solution 2 x 3ml
LC-CEX-H-01 LudgerClean CEX-H cartridges 2 x 6 cartridges
LL-COLLV-01 Collection vials with PTFE lined caps 2 x 6 vials
LL-REACT-01 Reaction vials with PTFE lined caps 2 x 6 vials
QA-Bio-QA-Bio-Orela O-連接甘氨酸釋放試劑盒:
準(zhǔn)備糖綴合物:通過去除可能干擾標(biāo)記程序的污染物,如鹽分、洗滌劑和染料,準(zhǔn)備糖蛋白或糖肽樣品。
干燥糖鏈:將樣品置于反應(yīng)瓶中并干燥。
向糖綴合物中添加釋放試劑:向每個樣品中添加Orela釋放試劑。
孵育:孵育樣品以允許釋放反應(yīng)進(jìn)行。
酸化:添加醋酸溶液并在4°C下孵育,以將糖基胺轉(zhuǎn)化為非還原糖鏈
釋放后清潔:使用陽離子交換柱去除肽或蛋白質(zhì)
儲存或分析釋放的糖鏈:現(xiàn)在釋放的糖鏈已準(zhǔn)備好進(jìn)行分析。
QA-Bio-QA-Bio-Orela O-連接甘氨酸釋放試劑盒文獻(xiàn)參考:
Kozak RP, Royle L, Gardner RA, Bondt A, Fernandes DL, Wuhrer M Improved nonreductive O-glycan release by hydrazinolysis with ethylenediaminetetraacetic acid addition. Anal Biochem. May 15;453:29-37 (2014).
Kozak RP, Royle L, Gardner RA, Fernandes DL, Wuhrer M. Suppression of peeling during the release of O-glycans by hydrazinolysis. Anal Biochem. 2012 Apr 1;423(1):119-28.
Sojar, H. T. and O.P. Bahl. A chemical method for the deglycosylation of proteins. Arch Biochem Biophys 259:52-57 (1987).
Turyan I, Hronowski X, Sosic Z, Lyubarskaya Y. Comparison of two approaches for quantitative O-linked glycan analysis used in characterization of recombinant proteins. Anal Biochem. Feb 1;446:28-36 (2014)..
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