酶在20微升或100微升的瓶中預(yù)混合。這允許研究人員在變性和天然條件下，快速去除糖蛋白中的大部分糖鏈（O-連接的粘液除外）。通過(guò)將酶組合成一種易于使用的預(yù)混合溶液，研究人員在追求蛋白質(zhì)去糖基化的過(guò)程中節(jié)省了時(shí)間和金錢。這些酶也可以單獨(dú)提供，每種酶20微升的小瓶裝（KE-DG01），允許研究人員更全面地表征附著在糖蛋白上的糖鏈，而不是使用我們的酶混合物。

艾美捷QA-Bio-酶促DeGlycoMx試劑盒包含一個(gè)20微升的小瓶，其中包含以下溶液中的酶：

PNGase F（腦膜敗血黃桿菌）

O-糖苷酶（肺炎鏈球菌）

神經(jīng)氨酸酶（尿素桿菌）

β-半乳糖苷酶（肺炎鏈球菌）

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（肺炎鏈球菌）

其他提供的試劑：

反應(yīng)緩沖液

變性溶液

Triton X

QA-Bio-酶促DeGlycoMx試劑盒特異性：

Enzymatic DeGlycoMx?試劑盒將從糖蛋白中去除所有N-連接的寡糖和許多O-連接的寡糖。使用酶PNGase F進(jìn)行N-連接糖鏈（天冬酰胺連接）的蛋白質(zhì)去糖基化。此外，所有絲氨酸或蘇氨酸連接的（O-連接）Gal-(b1-3)-GalNAc-(a1)以及所有唾液酸替代的Gal-(b1-3)-GalNAc-(a1)將使用神經(jīng)氨酸酶和O-糖苷酶的組合去除。添加β-半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶將有助于較大O-連接結(jié)構(gòu)的去糖基化。

QA-Bio-酶促DeGlycoMx試劑盒使用說(shuō)明：

在1.5毫升管中，將10微升的反應(yīng)緩沖液與高達(dá)50微克的糖蛋白混合在33微升的蒸餾水中。

添加2.5微升的變性溶液。輕輕混合，然后在沸水浴中放置5分鐘。在冰上冷卻。

添加2.5微升的Triton-X。

添加2微升的DeGlycoMx酶混合物。在37°C下孵化3小時(shí)。

注意：變性可以將酶消化的速率提高多達(dá)10倍。如果不希望變性，省略步驟2-3，用5微升的蒸餾水添加，并把孵化時(shí)間增加到24小時(shí)。

文獻(xiàn)參考：

Kobata, A. Use of endo- and exoglycosidases for structural studies of glycoconjugates. Anal Biochem 100:1- 14 (1979).

Kim MS, Leahy D. Enzymatic deglycosylation of glycoproteins. Methods Enzymol.533:259-63 (2013).

Magnelli PE, Bielik AM, Guthrie EP. Identification and characterization of protein glycosylation using specific endo- and exoglycosidases. J Vis Exp. Dec 26;(58):e3749 (2011).

Segu ZM, Hussein A, Novotny MV, Mechref Y. Assigning N-glycosylation sites of glycoproteins using LC/MSMS in conjunction with endo-M/exoglycosidase mixture. J Proteome Res. Jul 2;9(7):3598-607 (2010).

Sojar, H. T. and O.P. Bahl. A chemical method for the deglycosylation of proteins. Arch Biochem Biophys 259:52-57 (1987).

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