【前情回顧】彗星分析怎么做？專業(yè)彗星分析試劑盒一站式解決方案

【前情回顧】Comet Assay Kits 彗星分析試劑盒說明書（以STA-350，3孔板為例）

我們都知道彗星實(shí)驗(yàn)（comet assay）的別名也叫單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)（single cell gel electrophoresis，SCGE）,是用來有效評估DNA損傷的一種檢測方法，或許它的檢測原理你已經(jīng)熟記于心了，但是它究竟有哪些應(yīng)用，實(shí)驗(yàn)過程中常見問題有哪些，不同問題又要怎么處理。。。。。。看到這里是不是有些凌亂了，今天我們就來一鍋燴了它！

原理：器官或組織經(jīng)處理（化學(xué)或物理因素，如輻射、重金屬等）后，細(xì)胞中的DNA發(fā)生單鏈或雙鏈斷裂，經(jīng)細(xì)胞及其核膜裂解后，DNA解旋，在電場作用下，DNA 斷片遷移出細(xì)胞核，形成彗星狀的電泳圖譜。正常細(xì)胞的大分子DNA在電場作用下遷移距離較短，DNA仍保留在細(xì)胞核的范圍，形成圓形或輕微拖尾的圖譜。DNA損傷愈大，DNA碎段就愈多，愈小的DNA碎段游離的速度就愈快，也游離愈遠(yuǎn)，因而形成了彗星的尾部，而較大的一些碎段位置則靠近細(xì)胞核，因而形成彗星的頭部。DNA碎段的游動的程度不同，使它呈現(xiàn)出彗星狀，彗星的長度（從細(xì)胞核到彗星尾端的距離）與DNA的損害程度有關(guān)，彗星尾端愈長，細(xì)胞的損害程度愈大。

應(yīng)用：DNA損傷是指由化學(xué)或物理因素引起的DNA鏈斷裂、分子基體修飾和DNA交聯(lián)等。如果這種損傷沒有得到及時修復(fù)，就會引起突變，乃至癌變。彗星實(shí)驗(yàn)從一種在單細(xì)胞水平上檢驗(yàn)DNA鏈損傷的靈敏方法，可以用來判別某種物質(zhì)是否是致癌物，并衡量其對人體DNA修補(bǔ)的影響程度。目前彗星實(shí)驗(yàn)已經(jīng)逐步成為篩選致癌和致突變遺傳毒性物質(zhì)、監(jiān)測環(huán)境介質(zhì)中的遺傳毒性物質(zhì)和研究化合物致癌作用機(jī)理的重要方法，在風(fēng)險評價，尤其是在土壤和水環(huán)境污染潛在生態(tài)風(fēng)險和致癌健康風(fēng)險的研究方面也取得了很多重要的研究成果。由于DNA損傷關(guān)系到生物個體遺傳信息的表達(dá)，與種群密度和生態(tài)群落影響很可能存在直接或和間接聯(lián)系，因此該效應(yīng)標(biāo)記方法將不僅僅是從生物個體角度起到環(huán)境預(yù)警的作用，從區(qū)域管理的角度也可能作為反映生態(tài)和健康效應(yīng)的重要指標(biāo)。另外，鑒于彗星實(shí)驗(yàn)對于真核細(xì)胞的普遍適用性，也為目前致癌物環(huán)境毒理組學(xué)研究和致癌風(fēng)險評價體系提供了重要的手段。

傳統(tǒng)的彗星分析方法步驟繁瑣，需要單獨(dú)配置裂解試劑，需要提前對樣品DNA進(jìn)行處理，且每次檢測樣品有限，染色過程中需要EB等致癌染料。Cell Biolabs的OxiSelect? Comet Assays (Single Cell Gel Electrophoresis)克服了上述障礙，可以一次進(jìn)行多個樣品的處理，解決了由于處理時間不同而導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異。而且OxiSelect? Comet Assays (Single Cell Gel Electrophoresis)試劑盒可提供多種樣式供您選擇，有3孔板（貨號：STA-350/351/351-5）和96孔板不同樣式。其中OxiSelect? Comet Assay Kit中，包含彗星分析載玻片、彗星分析用瓊脂糖以及其它試劑；另外Cell Biolabs根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)要求，還單獨(dú)提供彗星分析載玻片，也根據(jù)3孔板樣式和96孔板樣式分為多種樣式。

彗星實(shí)驗(yàn)試劑盒信息：

彗星實(shí)驗(yàn)試劑盒內(nèi)特殊處理電泳載玻片：

除了操作簡便，OxiSelect^TMComet Assay Kit還有以下優(yōu)點(diǎn)：

1）適用于各種DNA損傷檢測，是一款非常好用的DNA損傷檢測篩選工具；

2）試劑盒中的載玻片經(jīng)過特殊處理以粘附低熔點(diǎn)瓊脂糖，避免“脫膠”問題出現(xiàn)；

3）采用特殊的DNA熒光染料，能有效降低背景干擾，更加方便讀取實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

常見問題：

Q1: 彗星分析試劑盒可以檢測什么類型的損傷？

A1: 彗星分析試劑盒檢測結(jié)果提供了DNA損傷的全局圖，可以檢測DNA雙鏈斷裂，單鏈斷裂和AP位點(diǎn)引起的損傷變化。根據(jù)電泳緩沖液的pH值不同，可分為中性彗星實(shí)驗(yàn)（pH=8.4）和堿性彗星實(shí)驗(yàn)（pH＞13）。中性彗星實(shí)驗(yàn)主要用于檢測DNA單鏈、雙鏈以及一部分AP位點(diǎn)的斷裂損傷，堿性彗星實(shí)驗(yàn)具有更高的靈敏性，可用于檢測更少量的單鏈和雙鏈斷裂損傷,以及大部分AP位點(diǎn)和堿不穩(wěn)定的DNA加合物。

Q2: 彗星玻片可以重復(fù)使用嗎?(這個是最近問得最多的一個問題)

A2：不能。Comet載玻片表面經(jīng)過了特殊處理，一旦整個載玻片經(jīng)歷了變性，電泳和洗滌的操作步驟，就不能再重復(fù)使用了。

Q3：我可以用常規(guī)載玻片代替Comet載玻片嗎？

A3：不能，Comet載玻片已經(jīng)過化學(xué)預(yù)處理，以增加附著力。 如果采用常規(guī)載玻片的話，您的細(xì)胞/瓊脂糖液滴將無法停留在載玻片上。

Q4：陽性對照怎么設(shè)置？

A4：用20uM依托泊苷(etoposide)處理細(xì)胞4小時，以形成彗星尾巴作為陽性對照。

Q5：用Vista Green染料染色后的玻片可以保存多久？

A5： 用Vista Green染色后的玻片可在4?C的黑暗環(huán)境中保存3個月，熒光也不褪色。 干燥且未沾有Vista Green的載玻片可以保存一年。

Q6：哪種電泳儀適合該彗星分析試劑盒？

A6：彗星分析試劑盒可用于任何水平電泳槽，不限于任何特定型號，但不能與垂直電泳儀一起使用。

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