內(nèi)在或外在因子 Xase 復(fù)合物激活酶原 X 因子會(huì)產(chǎn)生活性絲氨酸蛋白酶因子 Xa。 X 因子的激活需要重鏈的蛋白水解裂解,導(dǎo)致激活糖肽的釋放。 Xa因子的重鏈區(qū)含有絲氨酸蛋白酶催化結(jié)構(gòu)域,而輕鏈與酶原一樣,含有膜結(jié)合域。Xa因子參與凝血酶原酶復(fù)合物,催化凝血酶原快速轉(zhuǎn)化為凝血酶。 凝血酶原是一種酶復(fù)合物,由 Xa 因子(酶)和 Va 因子(輔助因子)組成,在鈣離子存在的情況下聚集在細(xì)胞表面。 盡管因子 Xa 可以獨(dú)立催化凝血酶原的激活,但隨著凝血酶原復(fù)合物的完全組裝,該反應(yīng)發(fā)生的速率增加了近 300,000 倍。 Xa 因子在體內(nèi)的凝血活性通過輔因子 Va 因子的失活或在凝血酶原酶復(fù)合物解體后通過抑制劑(例如 ATIII)直接抑制 Xa 因子而終止。 近年來,分子生物學(xué)家利用因子 Xa 用于細(xì)菌中表達(dá)的融合蛋白的位點(diǎn)特異性切割。 在目標(biāo)重組蛋白和促進(jìn)純化和/或表達(dá)的肽或蛋白質(zhì)之間摻入因子 Xa 敏感位點(diǎn)。 靶蛋白通過 Xa 因子裂解從表達(dá)的雜交體中釋放出來。 然后可以通過親和層析輕松去除 Xa 因子。Xa 因子是通過用從 Rus sell 的毒蛇毒液中分離出來的 X 因子激活劑激活純化的 X 因子來制備的。 通過在苯甲脒瓊脂糖凝膠上層析然后凝膠過濾,從活化混合物中純化因子 Xa。 也可獲得幾種改良形式的 Xa 因子,包括: B) b-Xa因子; 和 C) 人 Gla-domainless b-因子 Xa。 標(biāo)準(zhǔn)酶以 50% (vol/vol) 甘油/H2O 的形式提供,應(yīng)儲(chǔ)存在 -20°C 下。 通過 SDS-PAGE 分析確定純度,并在因子 Xa 凝血測(cè)定和/或顯色底物測(cè)定中測(cè)量活性。