內(nèi)在或外在因子 Xase 復合物激活酶原 X 因子會產(chǎn)生活性絲氨酸蛋白酶因子 Xa。 X 因子的激活需要重鏈的蛋白水解裂解,導致激活糖肽的釋放。 Xa因子的重鏈區(qū)含有絲氨酸蛋白酶催化結構域,而輕鏈與酶原一樣,含有膜結合域。Xa因子參與凝血酶原酶復合物,催化凝血酶原快速轉化為凝血酶。 凝血酶原是一種酶復合物,由 Xa 因子(酶)和 Va 因子(輔助因子)組成,在鈣離子存在的情況下聚集在細胞表面。 盡管因子 Xa 可以獨立催化凝血酶原的激活,但隨著凝血酶原復合物的完全組裝,該反應發(fā)生的速率增加了近 300,000 倍。 Xa 因子在體內(nèi)的凝血活性通過輔因子 Va 因子的失活或在凝血酶原酶復合物解體后通過抑制劑(例如 ATIII)直接抑制 Xa 因子而終止。 近年來,分子生物學家利用因子 Xa 用于細菌中表達的融合蛋白的位點特異性切割。 在目標重組蛋白和促進純化和/或表達的肽或蛋白質之間摻入因子 Xa 敏感位點。 靶蛋白通過 Xa 因子裂解從表達的雜交體中釋放出來。 然后可以通過親和層析輕松去除 Xa 因子。Xa 因子是通過用從 Rus sell 的毒蛇毒液中分離出來的 X 因子激活劑激活純化的 X 因子來制備的。 通過在苯甲脒瓊脂糖凝膠上層析然后凝膠過濾,從活化混合物中純化因子 Xa。 也可獲得幾種改良形式的 Xa 因子,包括: B) b-Xa因子; 和 C) 人 Gla-domainless b-因子 Xa。 標準酶以 50% (vol/vol) 甘油/H2O 的形式提供,應儲存在 -20°C 下。 通過 SDS-PAGE 分析確定純度,并在因子 Xa 凝血測定和/或顯色底物測定中測量活性。