在上一篇文章中，小艾介紹了神經(jīng)信號(hào)如何在神經(jīng)元中進(jìn)行傳遞的：http://m.zihai029.com/featured/synapse-2.shtml

神經(jīng)元通過突觸相互交流，其中電化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)化為生化信號(hào)。信息通過釋放神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)入突觸間隙傳遞，并在突觸后側(cè)被相應(yīng)的受體蛋白接收【1】。在此過程中，突觸囊泡與突觸前膜融合，使內(nèi)囊泡膜暫時(shí)暴露于細(xì)胞外空間。

在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中，管腔蛋白表位因此可以被添加到培養(yǎng)基中的抗體結(jié)合，然后在隨后的網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用中摻入突觸小泡【2】。內(nèi)吞作用后，突觸小泡的內(nèi)腔被質(zhì)子 ATP 酶重新酸化。由此產(chǎn)生的質(zhì)子梯度需要用由特定囊泡神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的神經(jīng)遞質(zhì)分子重新加載突觸囊泡，為下一輪融合做好準(zhǔn)備 【3】。

通過這種方法，可以選擇性標(biāo)記具有持續(xù)囊泡循環(huán)的活躍突觸（圖1）。例如，如果應(yīng)用針對(duì) Synaptotagmin1 的抗體，則所有活躍的突觸都會(huì)獨(dú)立于其神經(jīng)遞質(zhì)表型進(jìn)行標(biāo)記（圖2）。相比之下，針對(duì)囊泡 GABA 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 (VGAT) 的抗體允許選擇性標(biāo)記專門激活的抑制性突觸【4】。pH 敏感熒光染料，例如CypHer5E和AcidiFluor Orange，僅在酸性環(huán)境中才會(huì)發(fā)熒光。因此，相應(yīng)的抗體偶聯(lián)物非常適合檢測(cè)活細(xì)胞中的再循環(huán)突觸囊泡，因?yàn)樗鼈儍H在抗體完全內(nèi)化和突觸囊泡腔重新酸化后才會(huì)亮起（圖2）。

圖1：用針對(duì)突觸囊泡蛋白管腔表位的熒光染色抗體標(biāo)記回收突觸囊泡。

圖2：在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中標(biāo)記回收囊泡（貨號(hào)105 311AF）。活細(xì)胞與培養(yǎng)基中的標(biāo)記抗體一起溫育30分鐘。

當(dāng)使用一級(jí)標(biāo)記抗體時(shí)，無需額外固定、透化或應(yīng)用任何二級(jí)試劑，即可直接觀察回收囊泡。或者，可以將一抗與NanoTags 二級(jí) FluoTag預(yù)孵育以形成一二抗體復(fù)合物。然后，這些復(fù)合物可以像初級(jí)標(biāo)記抗體一樣用于直接標(biāo)記活神經(jīng)元。

Synaptic Systems 提供針對(duì)突觸囊泡蛋白管腔表位的獨(dú)特抗體組合，適用于回收囊泡的活性依賴性標(biāo)記。一組不同的熒光團(tuán)偶聯(lián)物可滿足您的確切需求。

推薦產(chǎn)品

Synaptotagmin1（多克隆）

Synaptotagmin1（單克隆）

Synaptotagmin2（多克隆）

VGAT（多克隆）

參考文獻(xiàn)

【1】Sudhof，2004 年：突觸小泡循環(huán)。

【2】Kraszewski 等人，1995 年：活體培養(yǎng)海馬神經(jīng)元中的突觸小泡動(dòng)力學(xué)，用針對(duì)突觸結(jié)合蛋白管腔結(jié)構(gòu)域的 CY3 偶聯(lián)抗體進(jìn)行可視化。

【3】Gasnier，2000：將神經(jīng)遞質(zhì)加載到突觸小泡中。

【4】Martens 等人，2008 年：VGAT-C 末端的獨(dú)特管腔定位允許選擇性標(biāo)記活動(dòng)的皮質(zhì) GABA 能突觸。

想要了解更多產(chǎn)品資訊，就來聯(lián)系小艾吧！或者掃描下方二維碼，即可聯(lián)系您的專屬客服哦~