QA-Bio-酶解DeGlycoMx?試劑盒將從糖蛋白中去除牛的N-連接寡糖和許多O-連接寡糖。使用酶PNGase F去除N-連接（Asnlinked）。此外，所有Ser/Thr連接（O-連接）的Gal-（β1-3）-GalNAc-（α1）和所有唾液酸取代的Gal-。添加β-半乳糖苷酶和氨基葡萄糖苷酶將有助于較大O-連接結(jié)構(gòu)的脫糖。

艾美捷酶解DeglycMx?試劑盒：

產(chǎn)品編號(hào)：KE-DGMX

存儲(chǔ)：4°C。

試劑盒內(nèi)容：

試劑盒包括所需的酶和試劑，用于移除所有的N-連接寡糖和大多數(shù)O-連接糖。每個(gè)試劑盒可以在10次反應(yīng)中脫糖基超過(guò)0.5毫克的糖蛋白。

酶：

提供的酶為一種20微升預(yù)混合雞尾酒，包括：

PNGase F（腦膜炎奈瑟菌）25毫單位（mU）

O-糖苷酶（肺炎鏈球菌）6.25毫單位

神經(jīng)氨酸酶（尿素分解短桿菌）25毫單位

β-半乳糖苷酶（肺炎鏈球菌）15毫單位

葡萄糖胺苷酶（肺炎鏈球菌）5毫單位

其他提供的試劑：

5倍反應(yīng)緩沖液 - 200微升，250毫摩爾的磷酸鈉，pH 7

變性溶液 - 100微升

Triton X - 100微升

穩(wěn)定性：

幾天內(nèi)暴露在常溫下不會(huì)降低活性。如果適當(dāng)儲(chǔ)存，至少穩(wěn)定12個(gè)月。

酶解DeglycMx?試劑盒的使用說(shuō)明：

1、在1.5毫升管中，將10微升的5倍反應(yīng)緩沖液與高達(dá)50微克的糖蛋白混合在33微升的蒸餾水中。

2、加入2.5微升的變性溶液。輕輕混合后放入沸水浴中5分鐘。然后在冰上冷卻。

3、加入2.5微升的Triton-X。

4、加入2微升的DeGlycoMx酶混合物。在37°C下孵化3小時(shí)。 注意：變性可以將酶消化的速率提高至10倍。如果不需要變性，省略步驟2-3，加入5微升的蒸餾水，并將孵化時(shí)間增加至24小時(shí)。脫糖基的效率可以通過(guò)在SDS-PAGE凝膠上運(yùn)行樣品來(lái)測(cè)試。