FluoTag-X4抗RFP是由兩種內(nèi)部開發(fā)的單域抗體（sdAbs）混合而成，能夠以高親和力和特異性識(shí)別最常見的紅色熒光蛋白，如mRFP、mCherry、DsRed以及其他DsRed衍生物。它與熒光團(tuán)結(jié)合，可實(shí)現(xiàn)直接且高度特異性的熒光檢測(cè)，無需使用二抗。

最早被描述的紅色熒光蛋白之一是來自珊瑚盤菌（Discosoma sp.）的DsRed。自1999年發(fā)表以來，經(jīng)過20多個(gè)突變，幾年后出現(xiàn)了一種具有多種增強(qiáng)特性的單體版本mRFP1。從這種有前景的單體紅色熒光蛋白中，人們已經(jīng)描述了幾十種單體變體，其中mCherry是最受歡迎的衍生物之一。如今，在“fpbase”熒光蛋白數(shù)據(jù)庫這個(gè)開源數(shù)據(jù)庫中，可以找到800多種各種熒光蛋白的條目，其中包含了目前可用的最新變體。

NanoTag的納米抗體可以特異性且牢固地結(jié)合DsRed、RFP、mCherry以及其他家族成員。FluoTags直接與熒光團(tuán)結(jié)合，但也可以配備單個(gè)熒光團(tuán)以獲得更定量的讀數(shù)（FluoTag-Q），或者每個(gè)單域抗體配備兩個(gè)熒光團(tuán)（FluoTag-X2）。此外，NanoTag還開發(fā)了一種混合兩種sdAbs的組合，它們可以同時(shí)結(jié)合目標(biāo)蛋白，并且每個(gè)都帶有兩個(gè)熒光團(tuán)，總共在目標(biāo)蛋白上裝飾4個(gè)熒光團(tuán)（FluoTag-X4）。

艾美捷FluoTag-X4抗RFP AbberiorStar635P：

貨號(hào)：N0404-Ab635P-L

克隆：2B12、2A1

宿主：羊駝

生產(chǎn)于：大腸桿菌

應(yīng)用：免疫熒光（細(xì)胞內(nèi)染色）

注意：不建議在Western blot中使用該產(chǎn)品，因?yàn)閟dAbs主要識(shí)別天然/折疊蛋白。

稀釋度：1:250（相當(dāng)于每種sdAb克隆的濃度為5 nM）

靶標(biāo)：mRFP

特異性：mRFP（紅色熒光蛋白）以及其他衍生物，如mOrange、dsRed1、dsRED2、tdTomato、mCherry和mScarlet-i。

配方：從含有2% BSA（美國(guó)產(chǎn)地）的pH 7.4的PBS中凍干兩種sdAb克隆的混合物。

運(yùn)輸：常溫

儲(chǔ)存：含有凍干試劑的安瓿瓶可在2-8°C下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)12個(gè)月。復(fù)溶后，可在-80°C下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月。工作分裝可在-20°C下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)4周。

注意：僅用于體外/研究目的。無毒、無害、無傳染性。

使用FluoTag-X4 Atto 647N抗RFP sdAb（貨號(hào)N0404，稀釋度1:500）對(duì)表達(dá)TOM70-mCherry報(bào)告蛋白的PFA固定3T3細(xì)胞進(jìn)行免疫染色（mCherry信號(hào)以紅色表示，相應(yīng)的FluoTag信號(hào)以綠色表示，兩個(gè)通道的合并以黃色表示）。細(xì)胞核通過DAPI染色（藍(lán)色）可視化。

文獻(xiàn)參考：

Sanfilippo P, Kim AJ, Bhukel A, et al. Mapping of multiple neurotransmitter receptor subtypes and distinct protein complexes to the connectome. Neuron. Published online January 13, 2024. doi:10.1016/j.neuron.2023.12.014 (IF; fruit fly)

Rey S, Ohm H, Moschref F, Zeuschner D, Praetz M, Kl?mbt C. Glial-dependent clustering of voltage-gated ion channels in Drosophila precedes myelin formation. Elife. 2023;12:e85752. Published 2023 Jun 6. doi:10.7554/eLife.85752