長鏈脂肪酸（LCFA）是動物的重要燃料來源，作為β-氧化的底物，并且是許多不同細胞結(jié)構(gòu)的構(gòu)建模塊。長鏈未酯化脂肪酸（LCFA）通過膜轉(zhuǎn)運蛋白進入細胞，細胞中LCFA水平的增加在糖尿病、肥胖相關(guān)疾病、心血管疾病以及某些類型的癌癥中較為常見。因此，脂肪酸攝取是治療代謝紊亂的重要治療靶點，也是代謝研究的重要課題。

BioAssay Systems的熒光細胞基脂肪酸攝取檢測試劑盒使用一種熒光脂肪酸類似物，該類似物被脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白攝取并在細胞內(nèi)積累。加入猝滅試劑以阻斷培養(yǎng)基中的細胞外熒光信號。貼壁細胞攝取脂肪酸類似物后，底部讀取的熒光光度計在λex/em = 488/523 nm處測量熒光信號的增加。這種高通量檢測方法可用于評估細胞中的脂肪酸攝取活性，并篩選激活劑和抑制劑。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品脂肪酸攝取測定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 安全。非放射性檢測。

- 快速且靈敏。均相“加樣即讀”檢測。無需洗滌、裂解或染色步驟。

- 簡單便捷。可作為高通量檢測方法，用于細胞中脂肪酸轉(zhuǎn)運及其調(diào)節(jié)劑的篩選。

應(yīng)用：

- 測定完整細胞中長鏈脂肪酸的攝取。

- 評估配體或藥物對脂肪酸轉(zhuǎn)運的影響。

試劑盒組成（96孔板，100次檢測）：

- 檢測緩沖液：12 mL

- 底物：120 uL

- 猝滅試劑：1 mL

儲存條件：  

將所有試劑儲存于-20°C。有效期為收到后12個月。

注意事項：  

試劑僅供研究使用。打開前短暫離心試管。使用試劑時應(yīng)遵循實驗室試劑的常規(guī)注意事項。請參考安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細信息。

檢測步驟：

1. 為了避免交叉污染，在添加每種試劑或樣本之間更換移液管尖。建議使用多通道移液器。

2. 建議樣本以三份或更多進行檢測。

3. 建議盡量降低實驗處理中的DMSO濃度，以減少對細胞的損傷。盡量保持孔中的濃度在1%或以下。

A. 細胞培養(yǎng)、饑餓和處理

1. 在透明底部黑色96孔培養(yǎng)板中，每孔鋪200 uL濃度為5-8×10?的3T3-L1細胞。在細胞培養(yǎng)箱中于37°C孵育4小時或過夜。如果當天進行檢測，則建議使用促進細胞黏附的聚合物（如聚-D-賴氨酸）的培養(yǎng)板。  

   注意：每孔所需的細胞數(shù)量取決于細胞大小和脂肪酸的代謝需求。不同細胞系可能需要不同的細胞數(shù)量。

2. 移去200 uL舊培養(yǎng)基，并用90 uL無血清培養(yǎng)基饑餓細胞1小時，以增加其代謝需求。

3. 向饑餓培養(yǎng)基中加入10 uL實驗處理物，并在所需溫度下孵育所需時間（例如：37°C，30分鐘）。  

   注意：務(wù)必包括一個對照組，加入10 uL與處理物相同溶劑（如10% DMSO）的溶液，以及一個僅含培養(yǎng)基而無細胞的空白孔。

B. 加入工作試劑

1. 工作試劑制備：在加入孔之前，提前10分鐘制備工作試劑，并將其預(yù)熱至37°C。對于每個反應(yīng)孔，通過混合1 uL底物、8 uL猝滅試劑和100 uL檢測緩沖液來制備工作試劑。

2. 在保留無血清培養(yǎng)基的情況下，向細胞中額外加入100 uL工作試劑。

3. 在37°C下，使用底部讀取模式在λex/em = 488/523 nm處讀取孔板60分鐘的數(shù)據(jù)。使用60分鐘時的數(shù)據(jù)（F60）。  

   注意：如果無法使用這些波長，激發(fā)波長可在470-495 nm之間變化，發(fā)射波長可在500-550 nm之間變化。在這種設(shè)置下，熒光強度可能會較低。建議盡可能運行動力學數(shù)據(jù)，并每隔1-5分鐘測量一次。

抑制劑篩選示例協(xié)議

1. 鋪板細胞，并在37°C下孵育至少4小時。移去細胞培養(yǎng)基，用90 uL無血清培養(yǎng)基饑餓1小時。

2. 按照最終濃度的10倍準備抑制劑濃度，并加入10 uL至孔中，使孔中的化合物濃度為1倍。作為對照，向?qū)φ湛字屑尤?0 uL測試化合物所溶解的溶劑（如10% DMSO）。在37°C下孵育30分鐘。

3. 使用多通道移液器加入工作試劑，并在37°C下在λex/em = 488/523 nm處讀取孔板60分鐘的數(shù)據(jù)。

4. 使用以下公式計算活性百分比。

可選：在篩選抑制劑后，可能需要進一步篩選細胞毒性，以排除那些看似抑制脂肪酸攝取但實際上殺死細胞的化合物。BioAssay Systems提供多種細胞活性檢測產(chǎn)品，如C2LD-100、CQBL-05K或CQMT-500。

示例：

3T3-L1細胞脂肪酸攝取試驗。3T3 L-1細胞在60000個細胞/孔，饑餓，并按照方案進行處理。左上：分化和未分化的3T3-L1活性存在160 nM胰島素和30μM競爭對手2-溴棕櫚酸酯。頂端右圖：3T3-L1脂肪細胞從胰島素中攝取脂肪酸的增加。底部左：2-溴棕櫚酸酯的脂肪酸轉(zhuǎn)運抑制曲線。抑制劑是與工作試劑一起添加，而不是在30分鐘的預(yù)孵育過程中添加。右下：苦參素的脂肪酸轉(zhuǎn)運抑制曲線。在運行之前，將抑制劑孵育30分鐘。

文學：

1. Fong, J., Leu, S., & Chai, S. (1997). Differential inhibition of lipolysis by  2-bromopalmitic acid and 4-bromocrotonic acid in 3T3-L1 adipocytes.Lipids and Lipid Metabolism. 1344(1): 65-73.

2. Shintani, M., et al. (2000). Downregulation of leptin by free fatty acids in rat adipocytes: Effects of triacsin C, palmitate, and 2-bromopalmitate.

3. Szkudelski, T., Szkudelska, K. (2011). Short-term effects of palmitate and 2-bromopalmitate on the lipolytic activity of rat adipocytes. Life Sciences. 89(13-14): 450-455. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。