尿激酶型纖溶酶原激活劑（尿激酶，uPA）是一種關(guān)鍵的絲氨酸蛋白酶，參與細胞外基質(zhì)的降解，能夠催化纖溶酶原轉(zhuǎn)化為活性纖溶酶。它作為一種溶栓劑，能夠分解血栓，而在過表達時，已被報道會影響某些惡性腫瘤（如乳腺癌、前列腺癌等）的生長。BioAssay Systems的DUKI-100試劑盒提供了一種便捷的熒光法手段，用于篩選潛在的尿激酶抑制劑。在此檢測中，熒光底物與尿激酶反應(yīng)，抑制劑會降低在λex/em = 380/450 nm處的熒光強度。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品尿激酶抑制劑篩選試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

尿激酶抑制劑篩選試劑盒：

主要特點：

- 安全。非放射性檢測。

- 快速。檢測在30分鐘內(nèi)完成。

- 方便且高通量。均質(zhì)的“混合-孵育-測量”類型檢測，可輕松自動化，每天檢測數(shù)千個樣本。

應(yīng)用范圍：

用于藥物評估和篩選尿激酶的潛在抑制劑。

試劑盒組成（96孔板檢測100次）：

- 檢測緩沖液：10 mL

- 10 mM抑制劑：40 ?L

- 底物：600 ?L

儲存條件：

試劑盒在室溫下運輸。收貨后將所有組分儲存于-20°C。有效期：收貨后12個月。

注意事項：

試劑僅供研究使用。使用試劑時應(yīng)遵循實驗室試劑的常規(guī)預防措施。詳細信息請參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

操作步驟：

本檢測基于動力學反應(yīng)。為確保孵育時間一致，向樣本中加入工作試劑（WR）時應(yīng)迅速，混合應(yīng)簡短但充分。建議使用多通道移液器。檢測可在室溫下進行。注意：試劑盒中不包含酶。此抑制劑檢測需要提供感興趣的酶。

試劑準備：

在檢測前，將所有組分平衡至室溫，并在打開前短暫離心試管。每次檢測應(yīng)新鮮配制工作試劑（WR）。

酶準備：

酶應(yīng)在酶緩沖液中配制，例如50 mM Tris-HCl，pH 7.4，100 mM NaCl，0.08% BSA。以下協(xié)議針對Cell Sciences（產(chǎn)品編號CRU000A）的天然人尿激酶型纖溶酶原激活劑進行了優(yōu)化。如果使用不同的酶，建議通過實驗確定每孔使用的最佳酶量。

測試化合物準備：

將測試化合物溶解于合適的溶劑中（例如DMSO）。建議首先測試所選酶對溶劑的耐受性。在以下示例中，人尿激酶（Cell Sciences，產(chǎn)品編號CRU000A）能夠耐受高達0.3%的DMSO。如果需要參考IC50曲線，可以按照示例IC50曲線中的濃度準備阿米洛利鹽酸鹽抑制劑作為測試化合物。

96孔板中的抑制劑篩選：

1. 將5 ?L酶分別轉(zhuǎn)移至黑色平底96孔板的各個孔中。至少預留一個孔作為無抑制劑對照（“對照”）和一個孔作為無酶空白（“空白”）：分別向?qū)φ蘸涂瞻卓字屑尤? ?L酶和5 ?L檢測緩沖液。

2. 向?qū)φ蘸涂瞻卓字屑尤?5 ?L測試化合物溶解的檢測緩沖液。例如，如果測試化合物溶解于含有0.1% DMSO的檢測緩沖液中，則向這些孔中加入25 ?L該溶液。

3. 向其余含有酶的孔中加入25 ?L測試化合物。輕拍平板以混合均勻，并在室溫下孵育10分鐘，使抑制劑阻斷酶的活性。

4. 通過將每個孔的5 ?L底物和95 ?L檢測緩沖液混合，為所有孔準備好工作試劑。向所有孔中加入90 ?L工作試劑。輕拍平板以混合均勻。在室溫下孵育30分鐘。

5. 在λex/em = 380/450 nm處讀取熒光強度。

按照標準協(xié)議在96孔板中進行雙份檢測。酶在含有0.3% DMSO的條件下與阿米洛利共同孵育。

文獻參考：

1. Law, B. et al. (2004). Design, Synthesis, and Characterization of Urokinase Plasminogen-Activator-Sensitive Near-Infrared Reporter.Chemistry & Biology. 11, 99–106.

2. Mahmood N, Mihalcioiu C and Rabbani SA (2018) Multifaceted Role of the Urokinase-Type Plasminogen Activator (uPA) and Its Receptor (uPAR): Diagnostic, Prognostic, and Therapeutic Applications. Front.Oncol. 8, 24.

3. Rockway TW, Nienaber V, Giranda VL. (2002). Inhibitors of the protease domain of urokinase-type plasminogen activator. Curr Pharm Des. 8(28), 2541-58.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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