胰蛋白酶（EC 3.4.21.4）是一種消化性絲氨酸蛋白酶，能夠在許多真核和原核生物中水解膳食蛋白質(zhì)。胰蛋白酶主要在賴氨酸和精氨酸氨基酸的羧基側(cè)切割肽鏈，但不會在脯氨酸之前切割。BioAssay Systems的QuantiFluo?胰蛋白酶抑制劑檢測試劑盒使用一種熒光素異硫氰酸酯（FITC）標記的合成底物。熒光素標記的熒光信號被高度猝滅。當樣本中的胰蛋白酶消化底物時，底物被切割成更小的肽段，從而消除了熒光猝滅。通過在λex/em = 485/530 nm處測量FITC標記片段的熒光或熒光偏振（FP），抑制作用通過熒光強度的降低來確定。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品胰蛋白酶抑制劑檢測試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

胰蛋白酶抑制劑檢測試劑盒：

主要特點：

- 安全。非放射性檢測方法。

- 均質(zhì)且便捷。均質(zhì)的“混合-孵育-測量”類型檢測，無需洗滌和試劑轉(zhuǎn)移步驟。

- 穩(wěn)健且高通量。可輕松自動化，每天檢測數(shù)千個樣本。檢測穩(wěn)健，Z'因子大于0.7。

應(yīng)用范圍：

用于評估藥物和篩選潛在的胰蛋白酶抑制劑。

試劑盒組成（96孔板檢測100次）：

- 檢測緩沖液：10 mL

- 底物：100 ?L

儲存條件：

試劑盒在室溫下運輸。收貨后將所有組分儲存于-20°C。有效期：收貨后6個月。

注意事項：

試劑僅供研究使用。使用試劑時應(yīng)遵循實驗室試劑的常規(guī)預(yù)防措施。詳細信息請參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

操作步驟：

在檢測前，將所有組分平衡至室溫。本檢測基于動力學反應(yīng)。為確保孵育時間一致，向樣本中加入工作試劑時應(yīng)迅速，混合應(yīng)簡短但充分。建議使用多通道移液器。檢測可在室溫下進行。注意：本試劑盒不包含酶或抑制劑。客戶需自行提供所需的酶或抑制劑。

樣本準備：

為防止自身消化，純胰蛋白酶溶液可在酸性條件下（1 mM HCl，pH 3.0）長期保存于-80°C。在檢測緩沖液中稀釋純化的胰蛋白酶。胰蛋白酶應(yīng)置于冰上，并盡快使用。將測試化合物溶解于合適的溶劑中（例如DMSO）。建議首先測試所選酶對溶劑的耐受性。對于豬胰蛋白酶，檢測中DMSO的最終濃度應(yīng)小于2%。

96孔板中的抑制劑篩選：

1. 將30 ?L胰蛋白酶分別轉(zhuǎn)移至黑色平底96孔板的各個孔中。同時，分別準備30 ?L胰蛋白酶（“對照”）和30 ?L檢測緩沖液（“空白”）的孔。

2. 向?qū)φ蘸涂瞻卓字屑尤?0 ?L測試化合物溶解的緩沖液。例如，如果測試化合物溶解于含有0.1% DMSO的緩沖液中，則向這些孔中加入10 ?L該溶液。

3. 向其余含有酶的孔中加入10 ?L測試化合物。輕拍平板以混合均勻，并在室溫下孵育15分鐘，使抑制劑阻斷酶的活性。

4. 通過將每個孔的1 ?L底物和99 ?L檢測緩沖液混合，為所有孔準備好工作試劑。向所有孔中加入80 ?L工作試劑。輕拍平板以混合均勻。在室溫下避光孵育30分鐘，使用酶標儀在λex/em = 485/530 nm處讀取熒光或熒光偏振（FP）。

所需材料（但未提供）：

- 純化的胰蛋白酶（例如Sigma Aldrich，產(chǎn)品編號T8003），以及如果需要，胰蛋白酶抑制劑對照品（例如大豆胰蛋白酶抑制劑，Cayman Chemical，產(chǎn)品編號14502；苯甲磺酰氟（PMSF），Sigma Aldrich，產(chǎn)品編號P7626）。

- 移液裝置及配件（例如多通道移液器）、黑色平底96孔板（例如Corning Costar）、離心管，以及能夠讀取λex/em = 485/530 nm處熒光或熒光偏振的酶標儀。

左圖：胰蛋白酶與不同濃度的大豆胰蛋白酶抑制劑孵育，生成熒光IC50曲線。

右圖：為熒光偏振（FP）測量生成了第二條IC50曲線。

文獻參考：

1. Manea, M., Mezo, G., Hudecz, F., & Przybylski, M. (2007). Mass spectrometric identification of the trypsin cleavage pathway in lysylproline containing oligotuftsin peptides. Journal of Peptide Science. 13(4):227–236.

2. López-Otín, C., Bond, J. S. (2008). Proteases: multifunctional enzymes in life and disease. Journal of Biological Chemistry, 283(45): 30433–30437.

3. Shah, D., Mital, K. (2018). The Role of Trypsin: Chymotrypsin in Tissue Repair. Advances in Therapy, 35(1): 31–42.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。