腺苷二磷酸（ADP）是ATP在ATP酶作用下脫磷酸的產(chǎn)物。 ADP可以通過ATP合酶重新轉(zhuǎn)化為ATP。ADP水平可以調(diào)節(jié)參與中間代謝的幾種酶。傳統(tǒng)上，ADP水平是通過熒光素酶/熒光素介導(dǎo)的檢測方法來測量的，這需要先將ADP轉(zhuǎn)化為ATP。然而，由于這些檢測方法需要在將ADP轉(zhuǎn)化為ATP之前測量樣本中的ATP，如果新生的ATP濃度顯著高于ADP濃度，那么ATP信號就會淹沒ADP信號。BioAssay Systems新設(shè)計的ADP檢測試劑盒提供了一種方便的熒光法來測量ADP水平，即使在存在ATP的情況下也可以檢測。在該檢測中，ADP被轉(zhuǎn)化為ATP和丙酮酸。生成的丙酮酸隨后通過熒光法進行定量（激發(fā)波長/發(fā)射波長=530/590 nm）。該檢測方法簡單、靈敏、穩(wěn)定、適用于高通量篩選，并且可以檢測到低至0.1 uM的ADP。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品【干冰】EnzyChrom ADP檢測試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

【干冰】EnzyChrom ADP檢測試劑盒：

主要特點：

安全。非放射性檢測。

靈敏且準(zhǔn)確。可以定量低至0.1 uM的ADP。

均質(zhì)且方便。“混合-孵育-測量”型檢測。

無需洗滌和試劑轉(zhuǎn)移步驟。

穩(wěn)健且適用于高通量篩選（HTS）：可以輕松在HTS液體處理系統(tǒng)上自動化操作，每天處理數(shù)千個樣本。

試劑盒組成：

試劑A：6 mL

酶：120 uL

10%三氯乙酸（TCA）：6 mL

試劑B：6 mL

標(biāo)準(zhǔn)品：100 uL

中和劑：1.5 mL

應(yīng)用：細(xì)胞和其他生物樣本中ADP的測定。

儲存條件：將所有試劑儲存于-20°C。本產(chǎn)品在冰上運輸。保質(zhì)期至少為6個月。

注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時應(yīng)遵循實驗室試劑的常規(guī)注意事項。請參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細(xì)信息。

檢測步驟：

使用黑色平底板。在檢測前，將所有試劑恢復(fù)至室溫。

干擾：>10 uM的硫醇（如β-巰基乙醇、二硫蘇糖醇等）會干擾此檢測，應(yīng)避免使用。

1.標(biāo)準(zhǔn)品制備。將6 uL 3 mM標(biāo)準(zhǔn)品與894 uL蒸餾水混合，制備900 uL 20 uM ADP預(yù)混合液。

2.樣本制備。蛋白質(zhì)含量高且可能具有ATP酶活性的樣本（如細(xì)胞裂解液、血清等）在檢測前需要脫蛋白和中和。脫蛋白時，每100 uL樣本加入25 uL 10% TCA。渦旋振蕩后，以14000 rpm離心10分鐘。將100 uL清亮的上清液轉(zhuǎn)移到干凈的試管中，并用12.5 uL中和劑進行中和。對于細(xì)胞檢測，至少需要使用1×10?個細(xì)胞。細(xì)胞應(yīng)通過在100 uL dH?O中加入25 uL 10% TCA（每2×10?個細(xì)胞）進行勻漿裂解和脫蛋白，隨后按照上述步驟進行離心和中和。注意：脫蛋白樣本的測量ΔRFU值需要乘以1.41，以補償樣本稀釋的影響。

3.將每個樣本的40 uL分別轉(zhuǎn)移到96孔板的各個孔中。對于含有丙酮酸的樣本，將每個樣本的40 uL分別加入到2個單獨的孔中，其中一個孔將作為樣本空白。

4.通過將45 uL試劑A、45 uL試劑B和1 uL酶混合，為每個孔制備工作試劑。如果樣本中含有丙酮酸，則需要包括樣本空白。對于樣本空白，制備以下工作試劑：45 uL試劑A + 45 uL試劑B（不含酶）。向每個檢測孔中加入80 uL相應(yīng)的工作試劑。輕拍平板以混合。在室溫下避光孵育30分鐘。

5.在λexc = 530 nm和λem = 590 nm處讀取熒光強度。

水中ADP標(biāo)準(zhǔn)曲線：

文獻參考：

1. Bradbury DA, et al (2000). Measurement of the ADP:ATP ratio in human leukaemic cell lines can be used as an indicator of cell

viability, necrosis and apoptosis. J Immunol Methods. 240:79-92.

2. Chen-Scarabelli C, et al (2004). Turning necrosis into apoptosis: the exacting task that can enhance survival. Am Heart J. 148:196-9.

3. Clement CC (2008). Development of Resorufin Fluorescence Assays for monitoring the ATP-ase Activity of H    uman Chaperone Hsp-70.FASEB J. 22:791. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。