淀粉酶（Amylase）屬于糖苷水解酶家族，通過(guò)作用于α-1,4-糖苷鍵將淀粉分解為葡萄糖分子。α-淀粉酶（EC3.2.1.1）在淀粉鏈的隨機(jī)位置進(jìn)行切割，最終從直鏈淀粉和支鏈淀粉中產(chǎn)生麥芽三糖、麥芽糖、葡萄糖和“極限糊精”。在哺乳動(dòng)物中，α-淀粉酶是一種主要的消化酶。在人類中，酶水平升高與唾液腺創(chuàng)傷、因唾液腺炎引起的腮腺炎、胰腺炎和腎衰竭有關(guān)。用于測(cè)量淀粉酶活性的簡(jiǎn)單、直接且適合自動(dòng)化的程序非常受歡迎。BioAssaySystems的EnzyChrom?α-淀粉酶檢測(cè)方法包括兩個(gè)步驟：（1）樣本中的α-淀粉酶水解淀粉，產(chǎn)物通過(guò)α-葡萄糖苷酶迅速轉(zhuǎn)化為葡萄糖，并通過(guò)葡萄糖氧化酶產(chǎn)生過(guò)氧化氫；（2）通過(guò)比色試劑測(cè)定過(guò)氧化氫濃度。

作為BioAssay Systems在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品【干冰】EnzyChrom α-EnzyChrom 氨基酶測(cè)試套件。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

應(yīng)用

-用于血液、唾液、尿液、谷物和其他農(nóng)業(yè)樣本中的α-淀粉酶活性測(cè)定。

主要特點(diǎn)

-靈敏且準(zhǔn)確。96孔板檢測(cè)的線性檢測(cè)范圍為0.3至50U/Lα-淀粉酶。

-便捷。操作過(guò)程包括加入單一工作試劑，孵育15分鐘，隨后加入檢測(cè)試劑，再孵育20分鐘，并在585nm處讀取吸光度。

試劑盒組成

-檢測(cè)緩沖液（pH7.0）：20mL

-底物：120uL

-檢測(cè)試劑：20mL

-酶A：120uL

-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品：1mL

-酶B：120uL

儲(chǔ)存條件

試劑盒在運(yùn)輸過(guò)程中使用冰塊冷藏。收到后，所有組分應(yīng)儲(chǔ)存于-20°C。有效期：收到后6個(gè)月。

注意事項(xiàng)

-試劑僅供研究使用。在使用試劑時(shí)，應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)安全措施。請(qǐng)參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細(xì)信息。

操作步驟

-試劑準(zhǔn)備：將所有組分平衡至室溫。將解凍后的酶混合液放在冰箱或冰上保存。底物可能會(huì)出現(xiàn)沉淀。使用前，輕輕振蕩試管以溶解沉淀；輕輕旋轉(zhuǎn)檢測(cè)試劑瓶。

-樣本準(zhǔn)備：理想情況下，樣本應(yīng)新鮮檢測(cè)。如果冷凍保存，α-淀粉酶可穩(wěn)定保存一個(gè)月。抗壞血酸、肝素、EDTA、EGTA、檸檬酸、SDS、Tris（>8mM）和乙醇（>0.4%）會(huì)干擾檢測(cè)，應(yīng)在樣本準(zhǔn)備中避免使用。如果樣本中含有葡萄糖，請(qǐng)按照“一般注意事項(xiàng)”中描述的方法處理樣本。建議對(duì)不同稀釋度的樣本進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。推薦稀釋倍數(shù)：血清50倍，唾液2000倍（在檢測(cè)緩沖液中稀釋）。

操作步驟

1.準(zhǔn)備400uM葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品：將提供的（300mg/dL）標(biāo)準(zhǔn)品10uL與406uL檢測(cè)緩沖液混合。將10uL檢測(cè)緩沖液、10uL400uM葡萄糖和10uL每個(gè)樣本分別加入到透明平底96孔板的不同孔中。

2.準(zhǔn)備足夠量的工作試劑：將40uL檢測(cè)緩沖液、0.5uL底物、1uL酶A和1uL酶B混合，為每個(gè)孔準(zhǔn)備足夠的工作試劑。將40uL工作試劑加入到每個(gè)孔中。在室溫（25°C）下孵育15分鐘。

3.加入檢測(cè)試劑：向每個(gè)孔中加入150uL檢測(cè)試劑。混合并孵育20分鐘（室溫25°C）。使用酶標(biāo)儀在585nm（540-610nm）處讀取吸光度。

一般注意事項(xiàng)

對(duì)于已知含有葡萄糖的樣本，使用膜過(guò)濾器（例如Millipore的MicroconYM-10）去除葡萄糖：將50uL樣本加載到MicroconYM-10（10kDa截留分子量）中，并加入500uL檢測(cè)緩沖液。以14000rpm離心30分鐘，檢查樣本液面，理想情況下樣本液面應(yīng)低于50uL。加入500uL檢測(cè)緩沖液并重復(fù)離心。使用移液器測(cè)量最終樣本體積，并計(jì)算稀釋倍數(shù)n=最終樣本體積/50uL。

文獻(xiàn)參考：

1. Han, M. J. (2020). Novel bacterial surface display system based on the Escherichia coli protein mipa. Journal of Microbiology and Biotechnology. 30(7): 1097-1103.

2. Bae, G.-S. (2020). Protective effect of nypa fruticans wurmb. Water extract on acute pancreatitis. Journal of Physiology & Pathology in Korean Medicine. 34(6): 334-340.

3. Lee, Sang-Bum, et al (2019). Impacts of whey protein on starch digestion in rumen and small intestine of steers. Journal of Animal Science and Technology 61.2: 98-108. 

BioAssay Systems是一家位于美國(guó)北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長(zhǎng)的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過(guò)50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了超過(guò)250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽(yáng)離子檢測(cè)。

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