膽固醇是一種固醇類脂質(zhì)，存在于細(xì)胞膜中，并在所有動(dòng)物的血液中運(yùn)輸。它用于形成細(xì)胞膜和激素，并在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。細(xì)胞對(duì)膽固醇水平的調(diào)節(jié)是一個(gè)復(fù)雜的系統(tǒng)，其中的異常情況與肥胖和心臟病有關(guān)。膽固醇攝取的增加也與高度增殖的癌細(xì)胞有關(guān)。通過(guò)監(jiān)測(cè)細(xì)胞對(duì)膽固醇的攝取，可以探索這些日益嚴(yán)重的健康問(wèn)題，并篩選可能的藥物治療方法。

BioAssay Systems的膽固醇攝取檢測(cè)試劑盒基于細(xì)胞對(duì)熒光標(biāo)記膽固醇探針的攝取。在λex/em = 485/535 nm處測(cè)量的熒光強(qiáng)度與細(xì)胞攝取的膽固醇量成正比。

作為BioAssay Systems在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品膽固醇攝取測(cè)定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)：

- 方便：直接在96孔熒光板中處理細(xì)胞。

- 安全：非放射性檢測(cè)。

- 高通量：可作為高通量96孔板檢測(cè)方法，每天可處理數(shù)千個(gè)樣本。

應(yīng)用：

- 直接檢測(cè)：貼壁細(xì)胞的膽固醇攝取、膽固醇攝取抑制劑的篩選以及藥物對(duì)膽固醇攝取的影響評(píng)估。

試劑盒組成（96孔板，100次檢測(cè)）：

- 檢測(cè)試劑：12 mL

- 熒光示蹤劑：250 uL

- 陽(yáng)性對(duì)照（2.5 mM）：20 uL

儲(chǔ)存條件：

試劑盒在室溫下運(yùn)輸。收到后將所有組分儲(chǔ)存于-20°C。有效期：收到后6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

試劑僅供研究使用。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)注意事項(xiàng)。請(qǐng)參考材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細(xì)信息。

試劑準(zhǔn)備：

在檢測(cè)前將所有組分平衡至室溫。打開(kāi)前短暫離心試管。

操作步驟：

示蹤劑培養(yǎng)基的制備：

通過(guò)將熒光示蹤劑稀釋1:50于無(wú)血清培養(yǎng)基或低百分比胎牛血清（FBS）培養(yǎng)基（<1%）中制備示蹤劑培養(yǎng)基。您將使用示蹤劑培養(yǎng)基來(lái)制備處理組、對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組的培養(yǎng)基。

使用96孔板的檢測(cè)步驟：

1. 使用黑色、平底、熒光96孔板進(jìn)行檢測(cè)。  

- 對(duì)于對(duì)照孔，將細(xì)胞以期望的密度接種于100 uL示蹤劑培養(yǎng)基中。  

- 對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照，在單獨(dú)的試管中將2.5 mM陽(yáng)性對(duì)照稀釋1:1000于示蹤劑培養(yǎng)基中，最終濃度為2.5 uM。將細(xì)胞以期望的密度接種于100 uL含有陽(yáng)性對(duì)照的示蹤劑培養(yǎng)基中。注意：您可能需要測(cè)試不同濃度的陽(yáng)性對(duì)照，以確定對(duì)所用細(xì)胞系最有效的濃度。  

- 對(duì)于每個(gè)處理組，在單獨(dú)的試管中將處理物或化合物以期望的濃度加入示蹤劑培養(yǎng)基中。將細(xì)胞以期望的密度接種于100 uL含有處理物的示蹤劑培養(yǎng)基中。  

- 注意：我們建議所有實(shí)驗(yàn)變量至少進(jìn)行雙份檢測(cè)，如果不是三份或更多的話。

2. 讓細(xì)胞生長(zhǎng)24至72小時(shí)，或達(dá)到期望的融合度。

3. 小心吸去所有孔中的培養(yǎng)基。

4. 用100 uL 1×PBS沖洗所有孔兩次。確保沖洗后完全去除PBS。

5. 在所有孔中加入100 uL檢測(cè)試劑。

6. 立即在λex/em = 485/535 nm處讀取熒光強(qiáng)度。

所需材料（但未提供）：

移液裝置、培養(yǎng)基、PBS、黑色平底96孔板以及能夠讀取λex/em = 485/535 nm的熒光板讀取器。

細(xì)胞密度與膽固醇攝取：

PANC1細(xì)胞在含有1% FBS的DMEM培養(yǎng)基中以不同細(xì)胞密度接種，并加入熒光示蹤劑。在檢測(cè)前培養(yǎng)48小時(shí)。

陽(yáng)性對(duì)照：

MDA-MB-231細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中用不同濃度的陽(yáng)性對(duì)照處理，并加入熒光示蹤劑。在檢測(cè)前培養(yǎng)72小時(shí)。

示例：

- 左圖：細(xì)胞密度與膽固醇攝取：PANC1細(xì)胞在含有1%胎牛血清（FBS）的DMEM培養(yǎng)基中以不同細(xì)胞密度接種，并加入熒光示蹤劑。在檢測(cè)前培養(yǎng)48小時(shí)。

- 右圖：陽(yáng)性對(duì)照：MDA-MB-231細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中用不同濃度的陽(yáng)性對(duì)照處理，并加入熒光示蹤劑。在檢測(cè)前培養(yǎng)72小時(shí)。

文學(xué)：

1. Beloribi-Djefaflia, S., et al (2016). Lipid metabolic reprogramming in cancer cells. Oncogenesis 5, e189.

2. Martin, B., van Golen, K. (2012). A Comparison of Cholesterol Uptake and Storage in Inflammatory and Noninflammatory Breast Cancer Cells. Int J Breast Cancer 2012, Article ID 412581.

3. Feng, D., et al (2010). Curcumin inhibits cholesterol uptake in Caco-2 cells by down-regulation of NPC1L1. Lipids Health Dis 9: 40.

BioAssay Systems是一家位于美國(guó)北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開(kāi)發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長(zhǎng)的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過(guò)50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了超過(guò)250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽(yáng)離子檢測(cè)。

作為BioAssay Systems在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。