乙二醛酶I（GLO-1），也稱為乳酸谷胱甘肽裂解酶，別名甲基乙二醛酶、醛酮變位酶、酮醛變位酶以及（R）-S-乳酸谷胱甘肽甲基乙二醛裂解酶，是一種催化半硫縮醛加合物異構(gòu)化的酶。這些半硫縮醛加合物是谷胱甘肽基團與醛類在自發(fā)反應中形成的。乙二醛酶I的主要生理功能是解毒甲基乙二醛，這是一種活性2-氧代醛，在低濃度下具有細胞抑制作用，而在毫摩爾濃度下具有細胞毒性。乙二醛酶I是針對細菌、原生動物和人類癌癥開發(fā)藥物的靶點。

在研究和藥物發(fā)現(xiàn)中，能夠簡單、直接且適合自動化的檢測生物樣本中GLO-1活性的方法是非常理想的。BioAssay Systems的乙二醛酶I試劑盒提供了一種靈敏且便捷的GLO-1活性測定方法。該方法通過監(jiān)測GLO-1反應產(chǎn)物S-乳酸谷胱甘肽在240 nm處吸光度的變化來實現(xiàn)。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品乙二醛酶i測定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

- 靈敏準確。檢測下限為4 U/L的GLO-1活性。

- 簡單高效。該程序涉及在微孔板中將提供的底物與樣本孵育。可以輕松自動化，每天可檢測數(shù)千個樣本。

應用

- 直接檢測：酶制劑或生物樣本中的GLO-1活性。

- 藥物發(fā)現(xiàn)/藥理學：藥物對GLO-1活性的影響。

試劑盒組成

- 檢測緩沖液（pH 6.6）：20 mL

- 底物：1 mL

- 96孔紫外滴定板：1塊

- 輔助底物：1 mL

儲存條件

試劑盒在室溫下運輸。將板在室溫下保存，其他組分在-20°C下保存。有效期：收到后12個月。

注意事項

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時需遵循實驗室試劑的常規(guī)注意事項。詳細信息請參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

純酶制劑的操作步驟

1. 在檢測前將所有試劑平衡至室溫。

2. 將每個樣本的40 ?L分別加入96孔紫外滴定板的不同孔中。同時，每次檢測需設置一個空白孔（不含GLO-1的樣本緩沖液）。

3. 按每孔計算，將160 ?L檢測緩沖液與8 ?L底物和8 ?L輔助底物混合，制備工作試劑。向每個孔中加入160 ?L工作試劑。

4. 在t = 0分鐘和t = 10分鐘時讀取240 nm處的光密度。如果測定低GLO-1活性，可以使用更長的反應時間。

含蛋白質(zhì)樣本的操作步驟

1. 每個樣本需要兩個離心管：一個用于GLO-1反應，一個用于樣本空白。將每個樣本的40 ?L（血清樣本應至少用檢測緩沖液稀釋2倍）分別加入兩個Eppendorf管中。

2. 按每管計算，將160 ?L檢測緩沖液與8 ?L底物和8 ?L輔助底物混合，制備工作試劑。

3. GLO-1反應。向GLO-1反應管中加入160 ?L工作試劑。在室溫下孵育20分鐘。

4. GLO-1反應的蛋白質(zhì)沉淀。孵育20分鐘后，向每個GLO-1反應管中加入70 ?L 4 M高氯酸，渦旋混合后在冰上冷卻15分鐘。（注意：蛋白質(zhì)沉淀必須在冰上進行。）15分鐘后，以14,000 rpm離心樣本5分鐘，將每個清晰上清液的200 ?L分別轉(zhuǎn)移至96孔紫外滴定板的不同孔中。

5. 樣本空白。向每個樣本空白管中加入70 ?L 4 M高氯酸，渦旋混合后在冰上冷卻15分鐘。15分鐘后，向每個樣本空白管中加入160 ?L工作試劑。渦旋混合后在冰上冷卻15分鐘。（注意：在加入工作試劑之前，必須先對樣本進行脫蛋白處理。）第二次冷卻后，以14,000 rpm離心樣本空白5分鐘，將每個清晰上清液的200 ?L分別轉(zhuǎn)移至96孔紫外滴定板的不同孔中。

6. 讀取240 nm處的光密度。

所需材料（但未提供）

高氯酸（例如Sigma貨號311413）、移液裝置及配件、酶標儀。

實驗示例

文獻：

[1]. Davis, KA and Williams, GR. (1969) Glyoxalase I, a lyase or an oxidoreductive isomerase? Can. J. Biochem 47: 553-6.

[2]. Ditzen, C et al. (2006) Protein biomarkers in a mouse model of extremes in trait anxiety. Mol Cell Proteomics 5: 1914-20.

[3]. Strzinek, RA. et al. (1972) The purification and characterization of liver glyoxalase I from normal mice and from mice bearing a lymphosarcoma.Cancer Res 32:2359-64.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術生物技術公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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