谷胱甘肽是由甘氨酸、谷氨酸和半胱氨酸組成的一種三肽。在紅細(xì)胞中，還原型谷胱甘肽對(duì)于維持血紅蛋白的還原狀態(tài)至關(guān)重要，從而保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。谷胱甘肽通過谷胱甘肽氧化酶參與過氧化氫的解毒過程。在谷胱甘肽代謝的關(guān)鍵酶（如葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、谷胱甘肽合成酶和谷胱甘肽還原酶）缺乏時(shí)，谷胱甘肽水平會(huì)降低。

簡(jiǎn)單、直接且易于自動(dòng)化的還原型谷胱甘肽測(cè)定方法在研究和藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域越來越受歡迎。BioAssay Systems的QuantiChrom?谷胱甘肽檢測(cè)試劑盒專為準(zhǔn)確測(cè)定生物樣本中的還原型谷胱甘肽而設(shè)計(jì)。改進(jìn)的5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)（DTNB）方法將脫蛋白和檢測(cè)（試劑A）合二為一。DTNB與還原型谷胱甘肽反應(yīng)生成黃色產(chǎn)物。在412納米處測(cè)量的吸光度與樣本中的谷胱甘肽濃度成正比。優(yōu)化的配方具有較長(zhǎng)的保質(zhì)期，且完全不受樣本渾濁的干擾。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品谷胱甘肽測(cè)定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)：

- 敏感且準(zhǔn)確。在96孔板測(cè)定中，谷胱甘肽的線性檢測(cè)范圍為0.4 - 100微摩爾。

- 簡(jiǎn)單便捷。操作過程包括將DTNB試劑與樣本混合，對(duì)含蛋白質(zhì)的樣本進(jìn)行脫蛋白處理，加入第二種試劑并讀取吸光度。

- 干擾低。氨基酸和常見緩沖液不會(huì)干擾檢測(cè)。

應(yīng)用領(lǐng)域：

- 直接測(cè)定：全血、血漿、血清、尿液、組織和細(xì)胞提取物中的還原型谷胱甘肽。

- 藥物發(fā)現(xiàn)/藥理學(xué)：藥物對(duì)谷胱甘肽代謝的影響。

試劑盒組成（96孔板測(cè)定，250次測(cè)試）：

- 試劑A：30毫升

- 試劑B：30毫升

- 校準(zhǔn)液：10毫升（相當(dāng)于100微摩爾谷胱甘肽）

儲(chǔ)存條件：

試劑盒在室溫下運(yùn)輸。將所有組分儲(chǔ)存于4°C。保質(zhì)期：收貨后12個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

試劑僅供研究使用。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)注意事項(xiàng)。請(qǐng)參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細(xì)信息。

操作程序：

重要提示：將試劑平衡至室溫。使用前搖勻試劑A。

樣本準(zhǔn)備：

- 全血樣本在檢測(cè)前需用蒸餾水稀釋20倍（n = 20）。

- 細(xì)胞裂解液的制備：通過在4°C下以1,000g離心10分鐘收集2×10?個(gè)細(xì)胞。用冷PBS洗滌細(xì)胞。在含有50 mM MES或磷酸鹽（pH 6-7）和1 mM EDTA的冷緩沖液中通過均質(zhì)化或超聲處理裂解細(xì)胞。在4°C下以10,000g離心15分鐘。使用上清液進(jìn)行檢測(cè)。

- 注意：β-巰基乙醇、二硫蘇糖醇和半胱氨酸已知會(huì)干擾本檢測(cè)。在樣本準(zhǔn)備過程中避免使用這些化合物。氨基酸不會(huì)干擾檢測(cè)。

96孔板操作流程：

1. 空白和校準(zhǔn)液：將100微升水和100微升校準(zhǔn)液分別加入透明底96孔板的孔中。將200微升水加入空白和校準(zhǔn)液孔中。

2. 樣本：全血樣本在檢測(cè)前需用蒸餾水稀釋20倍（n = 20）。對(duì)于血液、血清、血漿和其他含蛋白質(zhì)的樣本，需要進(jìn)行脫蛋白處理。試劑A包含用于顯色反應(yīng)和脫蛋白的成分。

- 將120微升樣本與120微升試劑A在1.5毫升離心管中混合。渦旋混合均勻。如果出現(xiàn)渾濁，可在臺(tái)式離心機(jī)中以14,000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘。如果混合液保持澄清，則無需離心。

3. 將200微升樣本/試劑A混合液加入96孔板的孔中。加入100微升試劑B。輕輕敲擊孔板以混合。

4. 在室溫下孵育25分鐘。在412納米處讀取吸光度。

比色皿操作流程：

- 將400微升樣本與400微升試劑A混合，如果出現(xiàn)沉淀，則離心樣本管。將600微升上清液與400微升試劑B混合。在室溫下孵育25分鐘。在412納米處測(cè)量吸光度，以水為空白對(duì)照。

- 將400微升校準(zhǔn)液和800微升水加入干凈的比色皿中，以水為空白對(duì)照測(cè)量412納米處的吸光度。

示例：

將20微升新鮮小鼠血液迅速與380微升水混合。采用96孔板測(cè)定法測(cè)得的血液中谷胱甘肽濃度為1124 ± 8微摩爾（n = 2）。

新制備的谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)曲線96孔平板測(cè)定

文獻(xiàn)：

1. Hsieh, P.-S., et al. (2021). Lactobacillus spp. Reduces ethanolinduced liver oxidative stress and inflammation in a mouse model of alcoholic steatohepatitis. Experimental and Therapeutic Medicine,21(3), 188.

2. AlAsmari, A. F., et al. (2020). Elucidation of the molecular mechanisms underlying sorafenib-induced hepatotoxicity. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2020, 7453406.

3. Sahin, T. D., et al. (2020). Infliximab prevents dysfunction of the vas deferens by suppressing inflammation and oxidative stress in rats with chronic stress. Life Sciences, 250, 117545. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長(zhǎng)的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測(cè)。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。