過氧化物（例如過氧化氫H?O?） 是在氧化應(yīng)激條件下形成的關(guān)鍵活性氧種類之一。高水平的過氧化物生成與多種病理狀況有關(guān)，例如衰老、哮喘、糖尿病、動脈粥樣硬化、白內(nèi)障、炎癥性關(guān)節(jié)炎和神經(jīng)退行性疾病。

簡單、直接且易于自動化的過氧化物定量檢測方法在研究和藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。BioAssay Systems的過氧化物檢測試劑盒專為直接測定生物樣本中的過氧化物濃度而設(shè)計，無需任何預(yù)處理。改進的方法利用了顯色反應(yīng)——Fe??-木偶橙反應(yīng)，在該反應(yīng)中，試劑中提供的Fe??被樣本中的過氧化物氧化為Fe??，從而形成紫色復(fù)合物。在540 - 610 nm處測量的顏色強度是樣本中過氧化物水平的準(zhǔn)確指標(biāo)。優(yōu)化后的配方顯著減少了原始樣本中物質(zhì)的干擾。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品過氧化物分析試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

- 靈敏且準(zhǔn)確。使用山梨醇增強顏色強度。96孔板檢測的檢測范圍為0.2 ?M（7 ng/mL）至30 ?M（1,020 ng/mL）H?O?。

- 簡單且高通量。操作過程僅需加入一種檢測試劑并孵育30分鐘。可輕松自動化為96孔板的高通量檢測方法，每天可檢測數(shù)千個樣本。

應(yīng)用

- 直接檢測：生物樣本中的H?O?（例如血清、枸櫞酸血漿、尿液、細胞裂解液、培養(yǎng)基）。

- 藥理學(xué)：藥物對過氧化物代謝的影響。

試劑盒組成（96孔板250次檢測）

- 試劑A：1 mL

- 試劑B：50 mL

- 標(biāo)準(zhǔn)液：100 ?L 3%穩(wěn)定化的H?O?

試劑盒在室溫下運輸。所有試劑儲存于4°C。保質(zhì)期：收貨后12個月。

注意事項

試劑僅供研究使用。使用試劑時應(yīng)遵循實驗室試劑的常規(guī)注意事項。請參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細信息。

操作步驟

樣本處理：某些化學(xué)物質(zhì)已知會干擾檢測，應(yīng)在樣本準(zhǔn)備時避免使用。這些包括抗壞血酸、EDTA、肝素、丙酮酸鈉（>1 mM）、DMSO（>0.02%）、NP-40（>0.6%）、SDS（>0.12%）、Tris（>8 mM）和乙醇（>0.4%）。樣本可在采集后立即分析，或分裝后儲存于–20°C。避免反復(fù)凍融。

試劑準(zhǔn)備：檢測前將試劑平衡至室溫。將1體積的試劑A與100體積的試劑B混合，配制足夠的檢測試劑。

96孔板操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)液制備：在檢測當(dāng)天新鮮配制標(biāo)準(zhǔn)液。將5 ?L 3% H?O?與495 ?L H?O混合于1.5 mL Eppendorf管中，充分混勻。將5 ?L該溶液與1465 ?L H?O混合。最終H?O?濃度為30 ?M（標(biāo)記為“預(yù)混液”）。按照表中所示稀釋標(biāo)準(zhǔn)液。

2. 將40 ?L稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)液和每個樣本分別加入透明平底96孔板的不同孔中。向所有標(biāo)準(zhǔn)液和樣本中加入200 ?L檢測試劑。

3. 在室溫下孵育30分鐘，并在540 - 610 nm（峰值吸收在585 nm）處讀取吸光度。

    - 注意：如果在極少數(shù)情況下，向樣本中加入檢測試劑后出現(xiàn)沉淀，將該樣本孔中的全部反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到1.5 mL Eppendorf管中，并在14,000轉(zhuǎn)/分鐘下離心2分鐘。小心地將200 ?L上清液轉(zhuǎn)移到干凈的孔中，并讀取吸光度。將吸光度讀數(shù)乘以1.2以考慮體積變化。

計算

從標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值中減去空白吸光度（水，#8），并繪制吸光度與H?O?濃度的關(guān)系圖。從樣本吸光度中減去空白吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定樣本中的過氧化物含量。

- 換算關(guān)系：1 ?M H?O?等于34 ng/mL或34 ppb。

所需材料（但未提供）

移液裝置及配件、96孔板和板式讀數(shù)儀。

實例

對山羊血清、人血清、293細胞培養(yǎng)基和新鮮人尿液進行雙份檢測，測得的過氧化物含量分別為8.7 ± 2.8、14.2 ± 2.7、2.4 ± 0.0和1.4 ± 0.6 ?M（n = 2）。

96孔板測定中的標(biāo)準(zhǔn)曲線

文獻：

[1]. Zhang, Q., et al (2019). A Multifunctional Nanotherapy for Targeted Treatment of Colon Cancer by Simultaneously Regulating Tumor Microenvironment. THERANOSTICS, 9(13), 3732-3753.

[2]. Liu, Z.,et al (2021). ROS-responsive and multifunctional antiAlzheimer prodrugs: Tacrine-ibuprofen hybrids via a phenyl boronate linker. European Journal of Medicinal Chemistry, 212,112997.

[3]. Adhikari, B., et al (2020). Cold plasma seed priming modulates growth, redox homeostasis and stress response by inducing reactive species in tomato (Solanum lycopersicum). Free Radical Biology & Medicine, 156, 57-69. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。