唾液酸是九碳糖酸及其N-或O-取代衍生物的總稱。其中最常見(jiàn)的成員是N-乙酰神經(jīng)氨酸（NANA）。唾液酸廣泛分布于哺乳動(dòng)物的組織和體液中，包括血清。研究表明，唾液酸化的寡糖具有抗病毒特性，并且會(huì)影響血液凝固和膽固醇水平。體液中的唾液酸水平也是診斷癌癥的重要標(biāo)志物。簡(jiǎn)單直接的唾液酸濃度測(cè)定方法在研究和藥物發(fā)現(xiàn)中具有廣泛的應(yīng)用。BioAssay Systems的唾液酸檢測(cè)采用改進(jìn)的Warren方法，唾液酸被氧化生成甲酰丙酮酸，后者與硫代巴比妥酸反應(yīng)生成粉紅色產(chǎn)物。在549 nm處的吸光強(qiáng)度或在λem/ex = 585/555 nm處的熒光強(qiáng)度與樣本中的唾液酸濃度成正比。

作為BioAssay Systems在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品唾液酸測(cè)定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

唾液酸測(cè)定試劑盒主要特點(diǎn)：

- 靈敏且準(zhǔn)確。最少可使用60 ?L樣本。96孔板檢測(cè)的線性范圍：比色法檢測(cè)為5至1000 ?M唾液酸，熒光法檢測(cè)為0.5至100 ?M。

應(yīng)用范圍：

- 直接檢測(cè)：生物樣本（如血清、血漿、唾液、乳汁）中的唾液酸。

試劑盒組成：

- 染料試劑：6 mL

- 氧化試劑：10 mL

- 10% TCA：5 mL

- 水解試劑：10 mL

- DMSO：12 mL

- 標(biāo)準(zhǔn)品：500 ?L，10 mM唾液酸

儲(chǔ)存條件：試劑盒在常溫下運(yùn)輸。將標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)存于-20°C，其余試劑儲(chǔ)存于室溫。自收貨之日起有效期為六個(gè)月。

注意事項(xiàng)：試劑僅供研究使用。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)預(yù)防措施。詳細(xì)信息請(qǐng)參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

比色法操作步驟：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備。將所有組分平衡至室溫。將25 ?L 10 mM標(biāo)準(zhǔn)品與225 ?L去離子水混合，制備1000 ?M唾液酸標(biāo)準(zhǔn)預(yù)混液。

2. 樣本處理。為了測(cè)定總唾液酸（TSA），樣本需要經(jīng)過(guò)水解以釋放結(jié)合的唾液酸。在離心管中，將20 ?L樣本、40 ?L去離子水和40 ?L水解試劑混合。在80°C下加熱60分鐘，冷卻后短暫離心。加入25 ?L 10% TCA，渦旋混合后以14,000 rpm離心10分鐘。將25 ?L上清液轉(zhuǎn)移至干凈的試管中，并標(biāo)記為“TSA”。

為了測(cè)定游離唾液酸（FSA），直接通過(guò)混合40 ?L樣本和10 ?L 10% TCA沉淀蛋白。渦旋混合后以14,000 rpm離心10分鐘。將25 ?L上清液轉(zhuǎn)移至干凈的試管中，并標(biāo)記為“FSA”。

3. 氧化反應(yīng)。為每個(gè)試管準(zhǔn)備工作試劑，將15 ?L水解試劑、50 ?L去離子水和65 ?L氧化試劑混合。向每個(gè)試管中加入125 ?L工作試劑，室溫下靜置60分鐘。

4. 顯色反應(yīng)。向每個(gè)試管中加入50 ?L染料試劑，混合后在100°C下加熱10分鐘。冷卻5-10分鐘后，向每個(gè)試管中加入100 ?L DMSO。混合后以14,000 rpm離心5分鐘。將250 ?L上清液轉(zhuǎn)移至透明平底96孔板的各個(gè)孔中。

5. 在549 nm（540-555 nm）處讀取吸光度。

熒光法操作步驟：

熒光法檢測(cè)比比色法靈敏10倍。在去離子水中準(zhǔn)備0、30、60和100 ?M唾液酸的標(biāo)準(zhǔn)品。樣本處理、氧化和顯色步驟與比色法相同，但最終反應(yīng)混合物需轉(zhuǎn)移至黑色平底96孔板的孔中。在λex = 555 nm和λem = 585 nm處讀取熒光強(qiáng)度。

所需材料（但未提供）：

- 移液裝置、離心管、離心機(jī)、加熱塊、透明平底96孔板、黑色96孔板（例如Corning Costar）和酶標(biāo)儀。

文獻(xiàn)參考：

1. Esievo, K. A. N. et al (2021). Elevated serum sialic acids, a potent biomarker of alloxan-induced type 1 diabetes in dogs by

ethanolic extract of Anogeissus leiocarpus. Journal of Diabetes &Metabolic Disorders, 1-8.

2. Taib, I.S. et al.(2015) "Palm oil tocotrienol-rich fraction attenuates testicular toxicity induced by fenitrothion via an oxidative stress mechanism." Toxicology Research 4.1: 132-142.

3. Carvalho FA, et al (2011). Variations on fibrinogen-erythrocyte interactions during cell aging. PLoS One. 6(3):e18167. 

BioAssay Systems是一家位于美國(guó)北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長(zhǎng)的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過(guò)50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了超過(guò)250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽(yáng)離子檢測(cè)。

作為BioAssay Systems在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。