5-AMP激活的蛋白激酶（AMPK）是細(xì)胞內(nèi)能量平衡的關(guān)鍵感應(yīng)器。AMPK在AMP/ATP比值升高時(shí)被激活，這種比值升高可能由多種因素引起，例如肌肉收縮、饑餓或缺氧。AMPK是一種由α-（63kDa）、β-（38kDa）和γ-（38kDa）亞基組成的異源三聚體蛋白復(fù)合物。每個(gè)亞基都已鑒定出同工型（α1、α2、β1、β2、γ1、γ2、γ3），理論上可以形成12種不同的蛋白。α-亞基包含一個(gè)絲氨酸/蘇氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，調(diào)節(jié)亞基包含AMP和ATP（γ-亞基）以及糖原（β-亞基）的結(jié)合位點(diǎn)。

AMPK通過催化結(jié)構(gòu)域內(nèi)Thr-172位點(diǎn)的磷酸化被激活。AMP結(jié)合會使AMPK活性比基礎(chǔ)水平增加2至5倍。AMP與γ-亞基結(jié)合會導(dǎo)致激酶的變構(gòu)激活，并在激酶結(jié)構(gòu)域中誘導(dǎo)構(gòu)象變化，保護(hù)AMPK免受Thr-172的去磷酸化。BioAssaySystems的基于細(xì)胞的ELISA檢測可測量完整細(xì)胞中的磷酸化AMPK，并將信號與總蛋白含量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。該抗體能夠識別兩種α-亞基，因此可用于來自所有組織（人類、小鼠、大鼠）的細(xì)胞。這種簡單高效的檢測方法免去了細(xì)胞裂解液的制備，并可用于短期和長期檢測中AMPK調(diào)控的研究。在此檢測中，生長在96孔板中的細(xì)胞在孔內(nèi)被固定并通透化。使用熒光ELISA測量AMPK磷酸化（pAMPK），隨后測量每個(gè)孔中的總蛋白。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品【干冰】EnzyFluo AMPK磷酸化檢測試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)

-靈敏：可在每孔少至500個(gè)細(xì)胞中測量pAMPK的調(diào)節(jié)。

-改進(jìn)升級：將標(biāo)準(zhǔn)的21小時(shí)總檢測時(shí)間縮短至6.5小時(shí)（實(shí)際操作時(shí)間為2.5小時(shí)）。

-簡單便捷：細(xì)胞直接在96孔板中培養(yǎng)，無需細(xì)胞裂解。

-準(zhǔn)確且高通量：將蛋白質(zhì)磷酸化水平與同一孔中的總細(xì)胞蛋白進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，極大地減少了孔間差異。可輕松自動化為高通量96孔板檢測，每天可處理數(shù)千個(gè)樣本。

應(yīng)用

-定量熒光免疫酶檢測：用于培養(yǎng)細(xì)胞中AMPK磷酸化狀態(tài)的檢測。

-評估直接和間接調(diào)節(jié)AMPK磷酸化：已測試物種包括人類、小鼠和大鼠。

試劑盒組成

-洗滌緩沖液：25mL

-封閉緩沖液：25mL

-蛋白染色液：6mL

-染料試劑：120?L

-Ab1：10?L

-Ab2（gR-HRP）：10?L

儲存條件

試劑盒在運(yùn)輸過程中使用冰袋。收到后，請將所有試劑儲存于-20°C。保質(zhì)期為收到后6個(gè)月。

注意事項(xiàng)

試劑僅供研究使用。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)預(yù)防措施。請參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細(xì)信息。

左側(cè)：二甲雙胍誘導(dǎo) PANC-1 細(xì)胞中 AMPK 磷酸化的時(shí)間過程。

右側(cè)：PANC-1 細(xì)胞在二甲雙胍處理 3 小時(shí)后的 AMPK 磷酸化劑量反應(yīng)曲線。未處理的 PANC-1 細(xì)胞中的基礎(chǔ) AMPK 磷酸化水平定義為 100%。

文獻(xiàn)參考：

1. Tsuda, Yuichi, et al (2017). Trypsin-Treated beta-Lactoglobulin Improves Glucose Tolerance in C57BL/6 Mice by Enhancing AMPK Activation and Glucose Uptake in Hepatocytes.. Biological and Pharmaceutical Bulletin 40.11: 1917-1922.

2. Chen, Hu, et al (2019). 6PGD inhibition sensitizes hepatocellular carcinoma to chemotherapy via AMPK activation and metabolic reprogramming. Biomedicine & Pharmacotherapy 111: 1353-1358.

3. Cao, J. et al (2020). 6PGD Upregulation is Associated with Chemo-and Immuno-Resistance of Renal Cell Carcinoma via AMPK SignalingDependent NADPH-Mediated Metabolic Reprograming. The American journal of the medical sciences, 360(3), 279-286. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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