法尼基轉(zhuǎn)移酶（FTase，EC 2.5.1.58）催化法尼基焦磷酸鹽將法尼基團轉(zhuǎn)移到靶蛋白C末端的半胱氨酸殘基上。如果調(diào)節(jié)不當，法尼基化蛋白（包括Ras超家族的小GTP酶）可能導致發(fā)育障礙和癌癥。簡單、直接且高通量的活性檢測方法在癌癥研究中應用廣泛，而BioAssay Systems的EFTS-400檢測試劑盒提供了一種方便的熒光法用于檢測FTase活性。在此檢測中，F(xiàn)Tase與法尼基焦磷酸鹽和丹磺酰肽底物反應，釋放出可通過熒光（激發(fā)波長/發(fā)射波長=340/550 nm）檢測的產(chǎn)物。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品【干冰】EnzyFluo 法尼基轉(zhuǎn)移酶活性測定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點  

安全便捷。非放射性檢測。“混合-孵育-測量”型檢測。無需洗滌和試劑轉(zhuǎn)移步驟。  

靈敏準確。在384孔板檢測中，F(xiàn)Tase的線性檢測范圍為0.024–3.2 U/L。  

高通量。可輕松自動化，每天檢測數(shù)千個樣本。

應用  

用于定量測定生物樣本中的FTase酶活性。

操作步驟  

本檢測基于酶催化的動力學反應。為確保孵育時間一致，加入工作試劑應迅速，混合應簡短但充分。推薦使用多通道移液器。注意：試劑盒中不包含F(xiàn)Tase酶。  

試劑準備：使用黑色平底384孔板。檢測前，將所有組分平衡至室溫，并在打開前短暫離心試管。每次檢測應新鮮配制工作試劑。  

酶準備：酶應在緩沖液中配制并新鮮使用。建議通過實驗確定每孔使用的最佳酶量。

384孔板FTase活性檢測  

1. 將5 uL樣本分別轉(zhuǎn)移至不同的孔中。  

2. 通過混合每孔0.5 uL底物、30 uL檢測緩沖液和1 uL TCEP，為所有樣本孔配制足夠的工作試劑（WR）。向所有樣本孔中加入25 uL WR。立即輕拍孔板以混合。  

3. 在時間零點和60分鐘時讀取熒光強度（激發(fā)波長/發(fā)射波長=340/550 nm），或連續(xù)60分鐘動態(tài)讀取熒光。

文獻參考：

[1]. Hougland, James et al (2010). Identification of novel peptide substrates for protein farnesyltransferase reveals two substrate classes with distinct sequence selectivities. Journal of Molecular Biology: 395(1),176-190.

[2] Long, Stephen et al (2001). The crystal structure of human protein farnesyltransferase reveals the basis for inhibition by CaaX tetrapeptides and their mimetics: PNAS: vol. 98(23) 12948-12953.

[3]. Rowinsky, EK et al (1999). Ras protein farnesyltransferase: A strategic target for anticancer therapeutic development. J Clin Oncol:17(11), 3631-52. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術生物技術公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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