蛋白質(zhì)磷酸化在細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)活性中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。已知許多蛋白激酶和磷酸酶參與多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。在生命科學(xué)研究和藥物發(fā)現(xiàn)中，能夠監(jiān)測這些信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、靶蛋白磷酸化狀態(tài)以及藥物效應(yīng)的快速檢測方法是十分理想的。

糖原合成酶激酶3-α（GSK3A，Gsk3a，2700086H06Rik，EC2.7.1.37）是一種多功能蛋白絲氨酸激酶，涉及對糖原合成酶和多種轉(zhuǎn)錄因子等多種調(diào)節(jié)蛋白的控制。它還在WNT信號通路和磷脂酰肌醇3-激酶（尤其是PIK3CG）信號通路中發(fā)揮作用。BioAssaySystems的GSK3A(S21)磷酸化ELISA試劑盒提供了一種快速、靈敏的檢測方法，用于測量培養(yǎng)細(xì)胞中的磷酸化蛋白pGSK3A(S21)，并將磷酸化水平與同一孔中的總蛋白含量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。這種簡單高效的檢測方法無需細(xì)胞裂解液制備，可用于研究潛在信號通路以及抑制劑、siRNA或激活劑對通路的影響。在此檢測中，生長在96孔板中的細(xì)胞經(jīng)過固定和通透處理。使用特異性一抗檢測GSK3A(S21)的磷酸化，隨后使用辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的二抗和熒光底物，以及用于測量同一孔中總蛋白的熒光試劑。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品EnzyFluo 人/小鼠GSK3A(S21)磷酸化ELISA試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)

改進(jìn)版：總檢測時(shí)間從標(biāo)準(zhǔn)的21小時(shí)縮短至6.5小時(shí)（實(shí)際操作時(shí)間2.5小時(shí)）。

簡單便捷：細(xì)胞直接在96孔板中培養(yǎng)，無需細(xì)胞裂解。

準(zhǔn)確且高通量：將蛋白磷酸化水平與同一孔中的總細(xì)胞蛋白進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，極大地減少了孔間差異。可作為高通量96孔板檢測方法，每天可處理數(shù)千個(gè)樣本。

應(yīng)用

-測定完整細(xì)胞中GSK3A(S21)的磷酸化狀態(tài)。

-評估激活劑、抑制劑、siRNA等對信號通路的調(diào)節(jié)作用。

-已測試物種：人、小鼠、大鼠和犬。

試劑盒內(nèi)容

-洗滌緩沖液：25mL

-封閉緩沖液：25mL

-蛋白染色液：6mL

-染料試劑：120uL

-Ab1：10uL

-Ab2（gM-HRP）：10uL

儲(chǔ)存條件

-本試劑盒在運(yùn)輸過程中使用冰袋包裝。收到后，請將所有試劑儲(chǔ)存于-20°C。這些試劑的保質(zhì)期約為收到后6個(gè)月。

注意事項(xiàng)

-試劑僅供研究使用。使用這些試劑時(shí)，請遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)注意事項(xiàng)。請參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細(xì)信息。

NIH3T3細(xì)胞中GSK3A(S21)磷酸化的誘導(dǎo)

-將3×10⁴個(gè)NIH3T3細(xì)胞接種于100?L培養(yǎng)基中，放入96孔板。在37℃下孵育過夜后，用50ng/mL的PDGFbb在無血清培養(yǎng)基中處理細(xì)胞。使用EGSK3A-100試劑盒檢測GSK3A(S21)的磷酸化。

文獻(xiàn)參考：

1. Cohen, P. (2002). The origins of protein phosphorylation. Nature Cell Biology. 4 (5): E127–130.

2. Smoly, I. et al (2017). An asymmetrically balanced organization of kinases versus phosphatases across Eukaryotes determines their distinct impacts". PLOS Computational Biology. 13 (1): e1005221.

3. Vlastaridis, P. et al (2017). Estimating the total number of phosphoproteins and phosphorylation sites in eukaryotic proteomes.GigaScience. 6 (2): 1–11 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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