蘋果酸脫氫酶（MDH）（EC 1.1.1.37）是一種酶，能夠在NAD存在的條件下可逆地催化L-蘋果酸氧化為草酰乙酸。 在真核細(xì)胞中存在兩種同工酶：MDH1和MDH2。MDH1存在于細(xì)胞質(zhì)中，在將蘋果酸轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體的蘋果酸-天冬氨酸穿梭過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。MDH2是一種線粒體酶，參與三羧酸循環(huán)，可逆地將L-蘋果酸轉(zhuǎn)化為草酰乙酸。在一些神經(jīng)退行性疾病（如阿爾茨海默病）中，MDH活性較高。

BioAssay Systems的非放射性、比色法MDH檢測(cè)試劑盒基于NADH偶聯(lián)的酶促反應(yīng)，將四氮唑鹽MTT還原為在565納米處具有最大吸收峰的還原型MTT。 565納米處吸光度的增加與酶活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品EnzyChrom 蘋果酸脫氫酶測(cè)定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)

快速且靈敏。線性檢測(cè)范圍（20微升樣品）：在37攝氏度下反應(yīng)20分鐘，檢測(cè)范圍為0.5至65 U/L。

方便且適用于高通量檢測(cè)。均質(zhì)“混合-孵育-測(cè)量”型檢測(cè)。可輕松在高通量篩選液體處理系統(tǒng)上自動(dòng)化操作，每天可處理數(shù)千個(gè)樣品。

應(yīng)用

生物樣本（如血漿、血清、紅細(xì)胞、組織和培養(yǎng)基）中MDH活性的測(cè)定。

試劑盒組成（96孔板，100次檢測(cè)）

檢測(cè)試劑緩沖液：10毫升

酶A：120微升

NAD/MTT：1毫升

酶B：120微升

底物：600微升

校準(zhǔn)液：1.5毫升

儲(chǔ)存條件

試劑盒在運(yùn)輸過程中使用冰塊包裝。收到后，所有組分應(yīng)儲(chǔ)存于-20攝氏度。保質(zhì)期：收到后6個(gè)月。

注意事項(xiàng)

試劑僅用于研究。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的一般安全措施。詳細(xì)信息請(qǐng)參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

操作步驟

本檢測(cè)基于動(dòng)力學(xué)反應(yīng)。為確保孵育時(shí)間一致，向樣品中加入工作試劑時(shí)應(yīng)迅速，混合應(yīng)簡短但充分。建議使用多通道移液器。可在任何期望的溫度（如25攝氏度或37攝氏度）下進(jìn)行檢測(cè)。

樣品準(zhǔn)備

血清和血漿可直接檢測(cè)。

組織：在解剖前，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）沖洗組織以去除血液。將組織（50毫克）在約200微升冷的50毫摩爾/升磷酸鉀緩沖液（pH 7.5）中勻漿。在4攝氏度下以14000×g離心10分鐘。取上清液進(jìn)行檢測(cè)。

細(xì)胞裂解液：通過在4攝氏度下以2000×g離心5分鐘收集細(xì)胞。對(duì)于貼壁細(xì)胞，不要使用蛋白酶收獲細(xì)胞；而是使用橡膠刮刀。在含有50毫摩爾/升磷酸鉀（pH 7.5）的冷緩沖液中適當(dāng)體積中勻漿或超聲細(xì)胞。在4攝氏度下以14000×g離心10分鐘。取上清液進(jìn)行檢測(cè)。

所有樣品可在-20至-80攝氏度下至少保存一個(gè)月。

試劑準(zhǔn)備

將試劑平衡至期望的反應(yīng)溫度（建議37攝氏度）。使用前短暫離心試管。

文獻(xiàn)參考：

1. Venkat, S. et al (2017). Genetically encoding thioacetyl-lysine as a non-deacetylatable analog of lysine acetylation in Escherichia coli.FEBS open bio, 7(11), 1805-1814.

2. Gan, Q et al (2016). Expanding the genetic code of Salmonella with noncanonical amino acids. Sci Rep 6, 39920.

3. Trivedi, AK et al (2015). Adaptation of oxidative phosphorylation to photoperiod-induced seasonal metabolic states in migratory songbirds.Comp. Biochem. Physiol. A 184: 34-40. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測(cè)。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。