一氧化氮（NO）是一種反應性自由基，在許多關鍵生理功能中發(fā)揮著重要作用。 NO是精氨酸通過一氧化氮合酶（NOS）氧化的產物，參與宿主防御和發(fā)育、調節(jié)蛋白的激活以及與功能生物分子的直接共價相互作用。

簡單、直接且非放射性的測量NOS的操作流程在研究和藥物發(fā)現(xiàn)中越來越受歡迎。 BioAssay Systems的EnzyChrom?一氧化氮合酶檢測試劑盒包含兩個步驟：一個NOS反應步驟，在此期間產生NO，隨后是一個NO檢測步驟。由于NOS產生的NO會迅速被氧化為亞硝酸鹽和硝酸鹽，因此通過改進的Griess方法將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽來測量NO的產生。該操作流程簡單，樣品預處理和檢測所需的時間縮短至短短40分鐘。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品EnzyChrom 一氧化氮合酶測定試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

靈敏且準確。在96孔板中檢測范圍為0.25 - 25 U/L。

快速且可靠。如果在60°C下將NO??還原為NO??，可在40分鐘內完成。

應用

直接檢測：用于生物樣本中的NOS活性。

藥物發(fā)現(xiàn)/藥理學：藥物對NOS活性的影響。

試劑盒組成（96孔板，100次檢測）

檢測試劑緩沖液：10毫升

底物：600微升

GDH：120微升

試劑A：12毫升

試劑B：500微升

試劑C：12毫升

試劑D：干燥（2管）

試劑E：1.5毫升

硫酸鋅：1毫升

標準品：1毫升

氫氧化鈉：1毫升

儲存條件

試劑盒在運輸過程中使用冰塊包裝。將檢測試劑緩沖液、底物、試劑D、試劑E和GDH儲存于-20°C。將所有其他試劑儲存于-20至4°C。保質期：收到后6個月。復溶后1周內使用試劑D。

注意事項

試劑僅用于研究。詳細信息請參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

計算

從標準OD值中減去空白OD（標準4）并繪制OD與標準濃度的關系圖。使用線性回歸擬合確定斜率。然后計算樣本的NOS活性為

其中，ODSAMPLE和ODBLANK分別是樣本和樣本空白的吸光度值，t是反應時間（20分鐘）。

單位定義：在檢測條件下（pH 7.5和37°C），一單位的NOS每分鐘催化產生1微摩爾的一氧化氮。

所需材料（但未提供）

移液裝置、Eppendorf管、Eppendorf離心機、透明、平底的96孔板或比色皿、酶標儀或分光光度計以及加熱塊或熱水浴（可選）。

一般注意事項

抗氧化劑和親核試劑（例如β-巰基乙醇、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇和半胱氨酸）可能會干擾此檢測。在樣品準備過程中避免使用這些化合物。然而，如果必須使用β-巰基乙醇或二硫蘇糖醇，則需要向標準品中添加等濃度的試劑。

文獻參考：

1. Macit, C et al. (2020). The effects of calorie restriction and exercise on age-related alterations in corpus cavernosum. Frontiers in Physiology, 11.

2. Bonilla, E., et al. (2017). Minocycline Protection against Paraquat Toxicity in Drosophila melanogaster. Toxicology International, 24(1),65-73.

3. Kimura, K. et a.l (2016). Pleiotropic effects of linagliptin monotherapy on levels of nitric oxide, nitric oxide synthase, and superoxide dismutase in hemodialysis patients with diabetes. The Showa University Journal of Medical Sciences, 28(1), 9-17.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術生物技術公司，專注于研發(fā)、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。