乙酰膽堿酯酶（EC 3.1.1.7，AChE），也稱為紅細胞膽堿酯酶，主要存在于血液和神經(jīng)突觸中。AChE催化神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿水解為膽堿和乙酸，這一反應(yīng)對于膽堿能神經(jīng)元在激活后恢復到靜息狀態(tài)是必需的。抑制該酶會導致乙酰膽堿積累，過度刺激煙堿型和毒蕈堿型受體，并破壞神經(jīng)傳導。AChE抑制是管理阿爾茨海默病的重要靶點，AChE抑制劑是用于其管理的最常見藥物。除了阿爾茨海默病，AChE抑制劑還在青光眼、重癥肌無力、膀胱膨脹等疾病的診斷或治療中發(fā)揮了作用。

BioAssay Systems的QuantiChrom?乙酰膽堿酯酶抑制劑篩選試劑盒基于改進的Ellman方法。在該方法中，乙酰膽堿酯酶作用產(chǎn)生的硫醇膽堿與5,5'-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）形成黃色產(chǎn)物。在412納米處測量的產(chǎn)物顏色強度與樣本中的酶活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品乙酰膽堿酯酶抑制劑試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 快速可靠：可在30分鐘內(nèi)完成。  

- 高通量：均質(zhì)“混合-孵育-測量”型測定。  

- 易于自動化：可輕松在高通量篩選液體處理系統(tǒng)上自動化操作，每天可處理數(shù)千個樣本。

應(yīng)用范圍：

- 高通量篩選乙酰膽堿酯酶抑制劑的抑制效果評估。

試劑盒組成（96孔板，100次測試）：

- 測定緩沖液（pH 7.5）：30毫升  

- DTNB：60微升  

- 底物（100 mM）：500微升  

- 散裝試劑：可根據(jù)需求定制尺寸。

儲存條件：

- 試劑盒在室溫下運輸。收到后將底物和DTNB儲存于-20攝氏度，其他組分儲存于室溫。有效期：收到后12個月。

注意事項：

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時應(yīng)遵循實驗室試劑的常規(guī)預(yù)防措施。請參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細信息。

操作步驟：

該測定基于酶催化的動力學反應(yīng)。為確保孵育時間一致，加入工作試劑的操作應(yīng)迅速，混合應(yīng)簡短但徹底。建議使用多通道移液器。注意：試劑盒中未包含AChE或?qū)φ找种苿?/p>

樣本準備：

- 使用測定緩沖液將純化的AChE稀釋至400 U/L。  

- 將測試化合物溶解于所選溶劑中。如果使用DMSO，建議先測試酶對DMSO的耐受性。對于來自電鰻（E. electricus）的AChE，加入反應(yīng)中的5微升測試化合物的DMSO濃度應(yīng)不超過40體積百分比（v%）。

試劑準備：

- 將所有組分平衡至所需的反應(yīng)溫度。工作試劑應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，并在30分鐘內(nèi)使用完畢。

以下協(xié)議針對來自電鰻（E. electricus）的AChE進行了優(yōu)化。如果分析其他物種，建議您通過實驗確定Km值，然后調(diào)整工作試劑中的底物體積，使200微升反應(yīng)中的底物最終濃度接近Km值。

96孔板反應(yīng)準備：

1. 將45微升AChE分別加入不同的孔中。將45微升測定緩沖液加入一個孔中，該孔作為無酶對照孔，可用于作為100%抑制的對照。  

2. 向無酶對照孔和一個含有AChE的孔（無抑制劑對照）中加入5微升測試化合物所溶解的溶劑。例如，如果測試化合物溶解于40體積百分比（v%）的DMSO中，則向這些孔中加入5微升40 v%的DMSO。  

3. 向其余含有AChE的孔中加入5微升測試化合物。孵育孔板15分鐘。  

4. 對于每個反應(yīng)孔，將154微升測定緩沖液與1微升底物和0.5微升DTNB混合。向每個樣本、樣本空白和無抑制劑對照孔中加入150微升這種工作試劑。輕拍孔板以混合。（注意：如果分析的物種不是電鰻，可以調(diào)整底物的體積。）  

5. 在酶標儀上分別在0分鐘和10分鐘時讀取412納米處的吸光度（OD412nm）。

來自電鰻的AChE與不同濃度的多奈哌齊和石杉堿甲共同孵育。每種抑制劑濃度中均含有20體積百分比（v%）的DMSO（在200微升反應(yīng)中最終濃度為0.5體積百分比）。

文獻參考：

1. Bakr, RO et al. (2021). New adenosine derivatives from aizoon canariense l.: In vitro anticholinesterase, antimicrobial, and cytotoxic evaluation of its extracts. Molecules, 26(5).

2. Ji, J et al. (2020). A polyphenol rich sugarcane extract as a modulator for inflammation and neurological disorders. PharmaNutrition, 100187.

3. El-Malah, A. et al (2019). New cyclooctathienopyridine derivatives in the aim of discovering better Anti-Alzheimer's agents. Journal of Molecular Structure. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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