碧綠色孔雀石磷酸鹽檢測(cè)試劑盒是基于碧綠色孔雀石、鉬酸鹽和游離磷酸根之間形成的綠色復(fù)合物來(lái)進(jìn)行定量的。該反應(yīng)快速生成的顏色可以在分光光度計(jì)（600 - 660 nm）或酶標(biāo)儀上方便地測(cè)量。這些非放射性比色試劑盒經(jīng)過(guò)優(yōu)化，提供了卓越的靈敏度和延長(zhǎng)的保質(zhì)期。該檢測(cè)方法簡(jiǎn)單快捷，僅需一個(gè)添加步驟即可進(jìn)行磷酸鹽測(cè)定。檢測(cè)可以在試管、比色皿或多孔板中進(jìn)行。檢測(cè)可以在 96 孔和 384 孔板中方便地進(jìn)行，適用于高通量篩選酶抑制劑。

作為BioAssay Systems在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷(xiāo)產(chǎn)品孔雀石綠磷酸鹽測(cè)定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)：

- 試劑非常穩(wěn)定：由于我們創(chuàng)新的配方，試劑不會(huì)沉淀。因此，在檢測(cè)前不需要過(guò)濾試劑，這通常是其他商業(yè)試劑盒所要求的。

- 高靈敏度和寬檢測(cè)范圍：能夠檢測(cè)到低至 1 皮摩爾的磷酸鹽，有效范圍在 0.02 uM 至 40 uM 磷酸鹽之間。

- 快速且方便：均相“混合即測(cè)”檢測(cè)法可在 20 分鐘內(nèi)定量游離磷酸鹽。

- 兼容常規(guī)實(shí)驗(yàn)室和高通量篩選（HTS）格式：檢測(cè)可以在試管、比色皿或微孔板中進(jìn)行，使用分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀。

- 穩(wěn)健且適合 HTS：在 96 孔和 384 孔板中觀察到的 Z' 因子為 0.7 至 0.9。可以在 HTS 液體處理系統(tǒng)上輕松自動(dòng)化。

應(yīng)用：

- 磷酸酶檢測(cè)：從肽、蛋白質(zhì)或小分子底物中釋放磷酸鹽。

- 脂肪酶檢測(cè)：從磷脂中釋放磷酸鹽。

- 核苷三磷酸酶檢測(cè)：從核苷三磷酸（ATP、GTP、TTP、CTP 等）中釋放磷酸鹽。

- 定量磷脂、蛋白質(zhì)和 DNA 等中的磷酸鹽。

- 藥物發(fā)現(xiàn)：高通量篩選磷酸酶抑制劑。

試劑盒內(nèi)容：96 孔板進(jìn)行 2,500 次檢測(cè)

- 試劑 A：50 mL

- 試劑 B：1 mL

- 標(biāo)準(zhǔn)品：1 mL（1 mM 磷酸鹽）

儲(chǔ)存條件： 該試劑盒在常溫下運(yùn)輸。當(dāng)在 4°C 下儲(chǔ)存時(shí)，試劑和標(biāo)準(zhǔn)品穩(wěn)定期為一年。

注意事項(xiàng)： 試劑僅供研究使用。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)預(yù)防措施。詳細(xì)信息請(qǐng)參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

使用 96 孔板的操作流程：

- 試劑準(zhǔn)備：每次檢測(cè)需要 20 uL 工作試劑。通過(guò)將 100 體積的試劑 A 和 1 體積的試劑 B 混合來(lái)準(zhǔn)備足夠量的工作試劑（例如，5 mL 試劑 A 和 50 uL 試劑 B）。工作試劑在室溫下至少穩(wěn)定一天。

- 重要提示：在使用前，試劑必須恢復(fù)至室溫。在每次檢測(cè)前，重要的是要檢查所有酶制劑和檢測(cè)緩沖液中不含游離磷酸鹽。可以通過(guò)將 20 uL 工作試劑加入 80 uL 樣本溶液中來(lái)方便地進(jìn)行此操作。在 620 nm 處的空白 OD 值應(yīng)低于 0.2。如果 OD 讀數(shù)高于 0.2，則檢查水中的磷酸鹽水平。雙蒸餾水的 OD 讀數(shù)通常低于 0.1。實(shí)驗(yàn)室洗滌劑可能含有高水平的磷酸鹽。確保實(shí)驗(yàn)室器具在徹底清洗后沒(méi)有磷酸鹽污染。

1. 磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備：通過(guò)將 40 uL 1 mM 磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品移入 960 uL 蒸餾水或酶反應(yīng)緩沖液中，制備含有 40 uM 磷酸鹽的預(yù)混溶液。對(duì)試管進(jìn)行編號(hào)。按照下表所示稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。將 80 uL 標(biāo)準(zhǔn)品雙份移入透明底部 96 孔板的孔中。添加僅含水或反應(yīng)緩沖液的空白對(duì)照。

2. 將 80 uL 待測(cè)樣品移入板的單獨(dú)孔中。

- 注意：對(duì)于酶反應(yīng)，可以通過(guò)添加特定抑制劑來(lái)終止反應(yīng)，或者可以直接通過(guò)添加工作試劑來(lái)停止反應(yīng)。在檢測(cè)前可能需要稀釋反應(yīng)混合物（見(jiàn)一般注意事項(xiàng)）。對(duì)于 ATP 酶或 GTP 酶檢測(cè)，ATP 或 GTP 的濃度應(yīng)低于 0.25 mM。如果反應(yīng)混合物中 ATP 或 GTP 的濃度 > 0.25 mM，則需要用蒸餾水稀釋樣品。例如，如果 ATP 酶反應(yīng)中 ATP 的濃度為 1 mM，在反應(yīng)結(jié)束后，需將反應(yīng)混合物用水稀釋 4 倍后再進(jìn)行檢測(cè)。

3. 向每個(gè)孔中加入 20 uL 工作試劑。輕輕敲擊板子使其混合均勻。

4. 在室溫下孵育 30 分鐘以顯色。

5. 在酶標(biāo)儀上測(cè)量 600 nm - 660 nm（620 nm）處的吸光度。

- 對(duì)于 384 孔板的檢測(cè)，操作步驟相同，只是標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液的體積應(yīng)為 40 uL，工作試劑的體積應(yīng)為 10 uL。

示例：

圖表：96 孔板中的磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。孵育 30 分鐘后，讀取 620 nm 處的吸光度。數(shù)據(jù)以平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差（n = 2）表示。有效檢測(cè)范圍為 0.02 - 40 uM 磷酸鹽。

文獻(xiàn)：

1. Lee, JS et al (2020). Host surface ectonucleotidase-CD73 and the opportunistic pathogen, Porphyromonas gingivalis, cross-modulation underlies a new homeostatic mechanism for chronic bacterial survival in human epithelial cells. Virulence, 11(1), 414-429.

2. Dangi, P et al (2019). Natural product inspired novel indole based chiral scaffold kills human malaria parasites via ionic imbalance mediated cell death. Scientific Reports, 9(1), 17785.

3. Wang, X et al (2020). The antitumor agent ansamitocin p-3 binds to cell division protein ftsz in actinosynnema pretiosum. Biomolecules, 10(5). 

BioAssay Systems是一家位于美國(guó)北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專(zhuān)注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷(xiāo)售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類(lèi)齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開(kāi)發(fā)，以滿(mǎn)足生命科學(xué)行業(yè)日益增長(zhǎng)的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過(guò)50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了超過(guò)250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽(yáng)離子檢測(cè)。

作為BioAssay Systems在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶(hù)提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。