PiBlue 磷酸鹽檢測(cè)試劑盒是基于專有的碧綠色孔雀石染料配方。PiBlue? 試劑與游離磷酸根形成藍(lán)色復(fù)合物。該反應(yīng)快速生成的顏色可以在分光光度計(jì)（600 - 660 nm）或酶標(biāo)儀上方便地測(cè)量。這些非放射性比色試劑盒經(jīng)過(guò)優(yōu)化，提供了卓越的靈敏度和延長(zhǎng)的保質(zhì)期。該檢測(cè)方法簡(jiǎn)單快捷，僅需一個(gè)添加步驟即可進(jìn)行磷酸鹽測(cè)定。檢測(cè)可以在試管、比色皿或多孔板中進(jìn)行。檢測(cè)可以在 96 孔板中方便地進(jìn)行，適用于高通量篩選酶抑制劑。

作為BioAssay Systems在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品磷酸鹽測(cè)定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)：

- 試劑非常穩(wěn)定：由于我們創(chuàng)新的配方，試劑不會(huì)沉淀。因此，在檢測(cè)前不需要過(guò)濾試劑，這通常是其他商業(yè)試劑盒所要求的。

- 高靈敏度和寬檢測(cè)范圍：能夠檢測(cè)到低至 20 皮摩爾的磷酸鹽，有效范圍在 0.4 uM 至 40 uM 磷酸鹽之間。

- 快速且方便：?jiǎn)卧噭盎旌霞礈y(cè)”檢測(cè)法可在 30 分鐘內(nèi)定量游離磷酸鹽。

- 兼容常規(guī)實(shí)驗(yàn)室和高通量篩選（HTS）格式：檢測(cè)可以在試管、比色皿或微孔板中進(jìn)行，使用分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀。

- 穩(wěn)健且適合 HTS：在 96 孔板中觀察到的 Z' 因子為 0.7 至 0.9。可以在 HTS 液體處理系統(tǒng)上輕松自動(dòng)化。

應(yīng)用：

- 磷酸酶檢測(cè)：從肽、蛋白質(zhì)或小分子底物中釋放磷酸鹽。

- 脂肪酶檢測(cè)：從磷脂中釋放磷酸鹽。

- 核苷三磷酸酶檢測(cè)：從核苷三磷酸（ATP、GTP、TTP、CTP 等）中釋放磷酸鹽。

- 定量磷脂、蛋白質(zhì)和 DNA 等中的磷酸鹽。

- 藥物發(fā)現(xiàn)：高通量篩選磷酸酶抑制劑。

儲(chǔ)存條件： 該試劑盒在常溫下運(yùn)輸。PiBlue 試劑和標(biāo)準(zhǔn)品在 4°C 下儲(chǔ)存時(shí)穩(wěn)定期為 12 個(gè)月。

注意事項(xiàng)： 試劑僅供研究使用。該試劑含有 0.44 M 硫酸。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)預(yù)防措施。詳細(xì)信息請(qǐng)參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

使用 96 孔板的操作流程：

- 重要提示：在使用前，試劑必須恢復(fù)至室溫并充分搖勻。PiBlue? 試劑對(duì)磷酸鹽非常敏感。重要的是，所有酶制劑和檢測(cè)緩沖液中不應(yīng)含有游離磷酸鹽。實(shí)驗(yàn)室洗滌劑可能含有高水平的磷酸鹽。確保實(shí)驗(yàn)室器具用蒸餾水徹底清洗，避免磷酸鹽污染。

1. 磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：通過(guò)將 40 uL 1 mM 磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品與 960 uL 蒸餾水混合，制備 1000 uL 40 uM 磷酸鹽預(yù)混溶液。對(duì)試管進(jìn)行編號(hào)。按照下表所示稀釋預(yù)混液以制備濃度標(biāo)準(zhǔn)品。試管中的磷酸鹽濃度如下。將 50 uL 稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品雙份移入透明底部 96 孔板的孔中。將稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)存于 4°C 以備后用。

2. 將 50 uL 待測(cè)樣品（例如酶反應(yīng)）雙份移入微孔板的孔中。對(duì)于酶反應(yīng)，可以通過(guò)添加特定抑制劑來(lái)終止反應(yīng)，或者直接通過(guò)添加 PiBlue? 試劑來(lái)停止反應(yīng)。反應(yīng)緩沖液可以作為樣品的空白對(duì)照。

3. 向每個(gè)孔中加入 100 uL PiBlue? 試劑。輕輕敲擊板子使其混合均勻。

4. 在室溫下孵育 30 分鐘以顯色。

5. 在酶標(biāo)儀上測(cè)量 620 nm（600 nm - 660 nm）處的吸光度。

使用比色皿的操作流程：

- 對(duì)于比色皿檢測(cè)，將 800 uL 試劑加入 400 uL 樣品和標(biāo)準(zhǔn)品中。按照微孔板檢測(cè)的描述進(jìn)行檢測(cè)。

一般注意事項(xiàng)：

- 孵育時(shí)間：顯色反應(yīng)在 30 分鐘內(nèi)完成。在磷酸鹽濃度較高（>100 uM）的情況下，或者在蛋白質(zhì)和金屬濃度較高時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)沉淀。如果出現(xiàn)沉淀，需用蒸餾水稀釋樣品并重復(fù)檢測(cè)。

- 酶反應(yīng)緩沖液：由于任何外源性游離磷酸鹽都會(huì)干擾檢測(cè)，因此重要的是確保用于檢測(cè)的蛋白質(zhì)制備、反應(yīng)緩沖液和實(shí)驗(yàn)室器具中不含游離磷酸鹽。可以通過(guò)將試劑加入緩沖液并測(cè)量顏色生成來(lái)方便地進(jìn)行檢查。

數(shù)據(jù)分析：

- 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以磷酸鹽皮摩爾數(shù)（pmoles）對(duì) OD620nm 進(jìn)行作圖。使用線性回歸分析確定待測(cè)樣品中的游離磷酸鹽含量。

示例：

圖表 1：96 孔板檢測(cè)中的磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線。將 100 uL PiBlue? 試劑加入 50 uL 磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品中。孵育 30 分鐘后，在酶標(biāo)儀上測(cè)量 620 nm 處的吸光度。有效檢測(cè)范圍為 0.4 uM 至 50 uM 磷酸鹽。根據(jù)空白對(duì)照值估計(jì)的檢測(cè)限為 20 皮摩爾。變異系數(shù)通常低于 6%。Z' 因子 > 0.7。使用競(jìng)品產(chǎn)品進(jìn)行了相同的檢測(cè)。

文獻(xiàn)：

1. Christensen, T., et al. (2020). In vitro characterization of a novel consensus bacterial 6-phytase and one of its variants. Current Biochemical Engineering 6(3): 156-171.

2. Nitta, K., et al. (2021). Investigation of the effects of actinorhodin biosynthetic gene cluster expression and a rpoB point mutation on the metabolome of Streptomyces coelicolor M1146. Journal of Bioscience and Bioengineering.

3. Nitta, K., et al. (2020). Multi-omics analysis of the effect of cAMP on actinorhodin production in Streptomyces coelicolor. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology 8: 595552.

4. Lejeune, C., et al. (2021). Impact of phosphate availability on membrane lipid content of the model strains, Streptomyces lividans and Streptomyces coelicolor. Frontiers in Microbiology 12: 623919.

5. Hwang, J. D., Ortiz-Maldonado, M., & Paramonov, S. (2016). Delivery of Formulated Industrial Enzymes with Acoustic Technology. Journal of laboratory automation, 21(1), 153-165.

BioAssay Systems是一家位于美國(guó)北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開(kāi)發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長(zhǎng)的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過(guò)50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了超過(guò)250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽(yáng)離子檢測(cè)。

作為BioAssay Systems在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。