對(duì)硝基苯磷酸酯（pNPP）是大多數(shù)磷酸酶的顯色底物，包括堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、蛋白酪氨酸磷酸酶和絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶。反應(yīng)生成的對(duì)硝基苯酚在堿性條件下會(huì)變成一種強(qiáng)烈的黃色可溶性產(chǎn)物，可以在分光光度計(jì)上方便地在 405 nm 處進(jìn)行測(cè)量。

這種均相“混合即測(cè)”檢測(cè)法只需向磷酸酶中添加一種試劑，并在吸光度讀取器上測(cè)量產(chǎn)物生成即可。該檢測(cè)可以在比色皿、試管或多孔板中進(jìn)行，操作溫度可以是室溫或 37°C。

作為BioAssay Systems在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品pNPP磷酸酶測(cè)定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)：

- 高靈敏度和寬線性范圍：檢測(cè)限通常為 3 ng 磷酸酶或更低。

- 均相且操作簡(jiǎn)單：無(wú)需洗滌或試劑轉(zhuǎn)移步驟。檢測(cè)可在 30 分鐘內(nèi)完成。

- 穩(wěn)健且適合高通量篩選（HTS）：所有試劑均與高通量液體處理儀器兼容。

應(yīng)用：

- 磷酸酶生產(chǎn)中的酶活性檢測(cè)和質(zhì)量控制。

- 磷酸酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)特性分析。

- 藥物發(fā)現(xiàn)：高通量篩選磷酸酶抑制劑。

儲(chǔ)存條件： 該試劑盒在常溫下運(yùn)輸。將試劑儲(chǔ)存于 -20°C，其他組分儲(chǔ)存于 4°C。保質(zhì)期：自收到之日起 12 個(gè)月。

注意事項(xiàng)： 試劑僅供研究使用。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)預(yù)防措施。詳細(xì)信息請(qǐng)參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

使用 96 孔板的操作流程：

1. 將所有試劑平衡至室溫：讓試劑在室溫下靜置 30 分鐘以平衡至室溫。按照每次檢測(cè)所需量，將 0.5 uL 試劑與 50 uL 檢測(cè)緩沖液混合，制備 pNPP 底物。

2. 對(duì)酶進(jìn)行系列稀釋：在適當(dāng)?shù)拿妇彌_液中對(duì)酶進(jìn)行系列稀釋。準(zhǔn)備足夠的溶液以進(jìn)行三份檢測(cè)。將每種酶稀釋液各取 50 uL 轉(zhuǎn)移至透明、平底 96 孔板的孔中。此外，準(zhǔn)備一個(gè)僅含 50 uL 酶緩沖液的空白對(duì)照。通過(guò)向每個(gè)孔中加入 50 uL pNPP 底物來(lái)啟動(dòng)反應(yīng)。

3. 在室溫下孵育 10 - 30 分鐘。

4. 通過(guò)加入 50 uL 終止液來(lái)停止反應(yīng)。通過(guò)快速輕拍板子進(jìn)行混合。或者，可以在軌道式振蕩器上將板子振蕩 10 秒。

5. 在 405 nm 處讀取每個(gè)孔的吸光度。

使用 384 孔板的操作流程：

384 孔板的檢測(cè)流程與 96 孔板相同，只是將 25 uL 樣品與 25 uL pNPP 底物混合。孵育完成后，加入 25 uL 終止液。

一般注意事項(xiàng)：

1. 建議每次檢測(cè)時(shí)新鮮配制試劑，盡管配制好的 pNPP 底物在 -20°C 下儲(chǔ)存時(shí)可穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá) 4 周。

2. 檢測(cè)可以在室溫或 37°C 下進(jìn)行。

3. 檢測(cè)緩沖液的 pH 為 7.2，與大多數(shù)中性磷酸酶（如蛋白磷酸酶）兼容。對(duì)于酸性磷酸酶，建議使用 100 mM 醋酸鈉（pH 5.5）、10 mM MgCl?作為酶緩沖液。對(duì)于堿性磷酸酶，建議使用我們的 DALP-250 檢測(cè)試劑盒。

示例：

- 左圖：PTP1B 是龐大的蛋白酪氨酸磷酸酶家族中的一員。在 384 孔板中進(jìn)行了 pNPP 檢測(cè)。通過(guò)加入 pNPP 底物啟動(dòng)反應(yīng)后，每 0.5 分鐘讀取一次，持續(xù) 30 分鐘。

- 右圖：初始速率（Vo）與酶濃度的關(guān)系圖。PTP1B 的檢測(cè)限為 3 ng。從線性范圍內(nèi)測(cè)得的酶活性為 2.2 umoles/min/ug。每分鐘的周轉(zhuǎn)數(shù)為 82,280。

文獻(xiàn)：

1. Lopez-Vales R et al (2010). Fenretinide promotes functional recovery and tissue protection after spinal cord contusion injury in mice. J Neurosci.30(9):3220-6.

2. Oborna I et al (2010). Increased lipid peroxidation and abnormal fatty acid profiles in seminal and blood plasma of normozoospermic males from infertile couples. Hum Reprod. 25(2):308-16.

3. Olsen AS, et al (2010). Limb regeneration is impaired in an adult zebrafish model of diabetes mellitus. Wound Repair Regen. 18(5):532-42. 

BioAssay Systems是一家位于美國(guó)北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開(kāi)發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長(zhǎng)的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過(guò)50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了超過(guò)250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽(yáng)離子檢測(cè)。

作為BioAssay Systems在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。