總蛋白濃度可以通過多種方法測(cè)定。 

然而，蛋白質(zhì)染料結(jié)合法具有簡(jiǎn)單、可靠、快速、易于自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，并且在評(píng)估腎功能和血腦屏障功能方面越來越受歡迎。BioAssay Systems的總蛋白測(cè)定試劑盒基于改進(jìn)的焦棓酚紅-鉬酸鹽蛋白質(zhì)染料結(jié)合法。在600納米處的顏色強(qiáng)度與樣品中總蛋白濃度成正比。這種單一試劑可用于定量測(cè)定尿液（蛋白尿）和腦脊液（血腦屏障）中的總蛋白。

作為BioAssay Systems在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品總蛋白測(cè)定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn) 

- 快速靈敏。測(cè)定僅需10分鐘。線性檢測(cè)范圍為5-200毫克/分升蛋白。對(duì)于尿液樣品，檢測(cè)范圍為1-20毫克/分升蛋白。  

- 穩(wěn)健可靠。尿液中的物質(zhì)干擾極小（<2%）。  

- 方便高效。均質(zhì)“混合-孵育-測(cè)量”類型測(cè)定法。可在高通量篩選液體處理系統(tǒng)上輕松自動(dòng)化，每天可處理數(shù)千個(gè)樣品。

應(yīng)用 

用于生物樣品（例如尿液、腦脊液）中總蛋白的測(cè)定。

96孔板讀取器測(cè)定程序 

在測(cè)定前，將所有試劑恢復(fù)至室溫。  

1. 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。分別將5微升去離子水、5微升提供的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和5微升樣品加入到透明平底96孔板的不同孔中。  

2. 測(cè)定。向所有測(cè)定孔中加入200微升試劑。輕拍孔板以混合均勻。孵育10分鐘。在孔板讀取器上測(cè)量600納米處的吸光度。

尿液樣品 

尿液樣品通常蛋白質(zhì)濃度很低，需要較大的樣品體積和內(nèi)標(biāo)。應(yīng)使用以下程序：  

1. 在離心管中，將100毫克/分升的標(biāo)準(zhǔn)品用去離子水稀釋至40毫克/分升（40微升100毫克/分升標(biāo)準(zhǔn)品+60微升去離子水）。  

2. 樣品需雙份運(yùn)行。如果存在顆粒物，需離心樣品并使用清亮的上清液進(jìn)行測(cè)定。將每個(gè)樣品的20微升分別轉(zhuǎn)移到四個(gè)不同的孔中：兩個(gè)樣品孔和兩個(gè)內(nèi)標(biāo)孔。向樣品孔中加入5微升去離子水，向內(nèi)標(biāo)孔中加入5微升40毫克/分升的標(biāo)準(zhǔn)品。將25微升去離子水轉(zhuǎn)移到兩個(gè)孔中。這將作為雙份的空白對(duì)照。  

注意：每個(gè)樣品不需要單獨(dú)的空白對(duì)照，同一塊孔板上的所有樣品可以使用相同的空白值。  

3. 向每個(gè)蛋白測(cè)定孔中加入200微升試劑。  

4. 在室溫下孵育10分鐘，然后在600納米處讀取吸光度。  

   注意：如果某個(gè)樣品的OD標(biāo)準(zhǔn)品 - OD樣品值低于0.05，則用等體積的水稀釋樣品并重復(fù)測(cè)定。將結(jié)果乘以稀釋因子2。低內(nèi)標(biāo)信號(hào)是由于尿液中的其他分子干擾所致，稀釋可以減少干擾，從而正確測(cè)量蛋白水平。

比色皿測(cè)定程序 

1. 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。分別將20微升去離子水、20微升提供的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和20微升樣品加入到不同的比色皿中。  

2. 測(cè)定。向每個(gè)比色皿中加入1毫升試劑。混合并孵育10分鐘。在分光光度計(jì)上測(cè)量600納米處的吸光度。  

3. 在室溫下孵育10分鐘，然后在600納米處讀取吸光度。

需要但未提供的材料 

對(duì)于96孔板測(cè)定：移液裝置、透明平底96孔板和孔板讀取器。對(duì)于比色皿測(cè)定：移液裝置、比色皿和能夠讀取600納米吸光度的分光光度計(jì)。

示例：

左：在96孔板讀數(shù)器（Spectramax M2）上進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

右：使用比色皿程序的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

文獻(xiàn)參考：

1. Joern WA, Schmoele L (1981). Urinary protein measurement by the Coomassie blue dye-binding method adapted to the ABA-l00 bichromatic analyzer. Clin Chem27:1305.

2. Sano K, et al (1981). Automatic assay of urinary protein using CoomassieBrilliant Blue G-250. Anal Biochem 113:197-201.

3. Watanabe N, et al (1984). Automatic method for determination of protein in urine with a Hitachi 726 analyzer: a modification of Bradford’s method.Anal Chem Specimen 7:27-31

BioAssay Systems是一家位于美國(guó)北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長(zhǎng)的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測(cè)。

作為BioAssay Systems在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。