日韩免费视频中文在线观看-国产成人在线视频一区二区三区-天天做天天爱天天大爽-欧美α片无限看在线观看免费-日本肥熟老熟妇15p-日本中文字幕三级在线视频-成人不卡视频在线观看-日韩一区二区三区无码人妻视频-青青草绿色视频在线观看

必須進行研磨、勻漿、超聲處理，蛋白質溶解度會更好，離心要充分，膜蛋白需用更劇烈的方法抽提，低豐度膜蛋白可能還要分步抽提(超速離心)。還有一點就是組織中的蛋白酶活性更強，需要注意抑 制蛋白酶的活性（加入ＰＭＳＦ）。

WesternBlot 一般上樣 30－100 微克不等，結果跟目的蛋白的豐度、上樣量、一二抗的量和孵育 時間都有關系，也與顯色時間長短有關。開始摸條件時，為了拿到陽性結果，各個步驟都可以量多一點 時間長一點，當然背景也就出來了。要拿到好的結果，如果抗體好的話比較容易，抗體不好的話就需要 反復地試了，當然有的不適合 WesternBlot 的怎樣做也不行。

不能使用脫脂奶粉，因為脫脂奶粉中含生物素，用ＢＳＡ代替應該好一點．

上述提到的兩種凝膠均可以使用，因為105KD 的蛋白在上述兩種膠的線性分辨范圍內(nèi)，但需注意 條帶位置。

－80℃，一兩年沒有問題。最關鍵兩條：不要被蛋白酶水解掉；不要被細菌消化掉(也是被 酶水解了)。

可以濃縮樣品，也可以根據(jù)你的目標分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地，超載30％是不會有 問題的。如果已經(jīng)超了不少了，而且小分子量的也要，可以考慮加大膠的厚度，可以試試 1.5mm 的。

200kd 的蛋白不好做， 分離膠用7％，積層膠3.5％。

你可以加大上樣量，沒有問題，還有轉移時你可以用減少電流延長時間，加20％甲醇。

如果是膜蛋白和胞漿蛋白，所用的去垢劑要溫和得多，這時最好加上NaF 去抑制磷酸化酶 的活性。

當然可以，有的甚至可以同時測幾十種樣品。

能，沒有問題。

一般5×10^6 就足夠了。