山梨醇脫氫酶（SDH）是一種能夠催化山梨醇和果糖相互轉(zhuǎn)化的酶。血液中SDH水平升高表明肝臟受損，因此SDH在肝臟疾病的診斷中發(fā)揮著重要作用，尤其是與轉(zhuǎn)氨酶聯(lián)合使用時(shí)。此外，SDH水平還可用于評估糖尿病并發(fā)癥，例如增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變。

BioAssay Systems的非放射性、比色法SDH檢測試劑盒基于NADH偶聯(lián)的酶促反應(yīng)，將四氮唑鹽MTT還原為其還原形式，該形式在565 nm處有最大吸收峰。565 nm處吸光度的增加與酶活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品山梨醇脫氫酶測定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

山梨醇脫氫酶測定試劑盒主要特點(diǎn)：

- 快速且靈敏。線性檢測范圍（20 ?L樣本）：12分鐘反應(yīng)時(shí)間為0.1至125 U/L。

- 方便且高通量。均質(zhì)的“混合-孵育-測量”類型檢測方法。可在高通量篩選液體處理系統(tǒng)上自動(dòng)化操作，每天可處理數(shù)千個(gè)樣本。

- 應(yīng)用范圍：用于生物樣本（例如血漿、血清、尿液、組織和培養(yǎng)基）中SDH活性的測定。

操作步驟：

本檢測基于動(dòng)力學(xué)反應(yīng)。為確保孵育時(shí)間一致，向樣本中加入工作試劑時(shí)應(yīng)迅速，混合應(yīng)簡短但充分。建議使用多通道移液器。檢測可在任何所需溫度下進(jìn)行（例如25°C或37°C）。

樣本準(zhǔn)備：

- 血清和血漿可直接檢測。

- 組織：解剖前，用磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4）沖洗組織以去除血液。將50 mg組織在200 ?L冷PBS緩沖液中勻漿。在4°C下以14,000 x g離心5分鐘，取上清液用于檢測。

- 細(xì)胞裂解液：通過在4°C下以2,000 x g離心5分鐘收集細(xì)胞。對于貼壁細(xì)胞，不要使用蛋白酶酶收獲細(xì)胞，而是使用橡膠刮刀。在適量的冷PBS緩沖液中勻漿或超聲處理細(xì)胞。在4°C下以14,000 x g離心5分鐘，取上清液用于檢測。

- 所有樣本可在-20至-80°C下保存至少一個(gè)月。

試劑準(zhǔn)備：將試劑平衡至所需反應(yīng)溫度（建議37°C）。使用前短暫離心試管。

檢測步驟：

1. 將100 ?L去離子水（ODH?O）和100 ?L校準(zhǔn)液（ODCAL）分別加入透明平底96孔板的孔中。

2. 向一個(gè)孔中加入20 ?L去離子水，作為空白對照。將每個(gè)樣本的20 ?L分別加入其他孔中。

3. 通過混合以下試劑為所有反應(yīng)孔準(zhǔn)備足夠量的工作試劑（WR）：對于每個(gè)96孔檢測，混合2 ?L底物、8 ?L NAD/MTT溶液、1 ?L二氮雜菲和75 ?L檢測緩沖液。向所有樣本和空白孔中加入80 ?L WR，輕拍平板以混合均勻。

4. 在所需溫度下孵育；在3分鐘（OD?）和15分鐘（OD??）時(shí)，使用平板閱讀器讀取565 nm處的吸光度。

所需材料（但未提供）：

- 移液裝置及配件（例如多通道移液器）、透明平底96孔板（例如Corning Costar）、離心管和平板閱讀器。

文獻(xiàn)參考：

1. Uzozie, A et al (2014). Sorbitol Dehydrogenase overexpression and other aspects of dysregulated protein expression in human precancerous colorectal neoplasms: a quantitative proteomics study.Mol Cell Proteomics. 13(5):1198-1218.

2. Linstad, RI at al (2013). Inhibition of Sorbitol Dehydrogenase by nucleosides and nucleotides. Biochem Biophys Res Commun. 435(2):202-208.

3. Aguayo, MF et al (2013). Sorbitol dehyodrogenase is a cytosolic protein required for sorbitol metabolism in Arabidopsis thalania. Plant Sci. 205-206: 63-75. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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