乳酸脫氫酶（LDH）是一種氧化還原酶，能夠催化乳酸和丙酮酸之間的相互轉化。毒性化合物常常通過誘導細胞凋亡或壞死來破壞細胞膜的完整性。LDH是一種穩(wěn)定的細胞質酶，當細胞膜受損時，它會釋放到細胞外環(huán)境中。因此，LDH通常被用于評估組織或細胞損傷的存在。比色法LDH釋放實驗是一種簡單而可靠的方法，通過測量細胞培養(yǎng)上清液中LDH的活性來評估細胞的毒性效應。該實驗基于四氮唑鹽被還原為甲臜染料的原理。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品乳酸脫氫酶細胞毒性試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 安全。非放射性實驗。

- 快速。10分鐘單試劑“混合-孵育-測量”型實驗。使用96孔板的高通量實驗允許每天同時處理數萬個樣本。

- 穩(wěn)定且適用于高通量篩選（HTS）。可以輕松與HTS液體處理系統(tǒng)自動化配合使用。

應用：

- 細胞毒性與凋亡：評估毒性化合物、毒素、洗滌劑、環(huán)境污染物等。

- 藥物發(fā)現：用于藥物毒性的高通量篩選。

試劑盒內容（96孔板100次測試）：

- 試劑：20 mL

- Tergitol：1 mL

- 儲存條件：試劑盒在室溫下運輸。收到后請于-20°C保存。保質期：收到后12個月。

- 注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規(guī)注意事項。請參考材料安全數據表以獲取詳細信息。實驗前請將所有試劑渦旋混勻并恢復至室溫。

實驗步驟：

- 樣本準備：實驗細胞應處于對數生長期。實驗前2天進行細胞傳代。含有10%胎牛血清（FBS）的培養(yǎng)基與該實驗兼容：無需在無FBS的培養(yǎng)基中傳代細胞。在96孔組織培養(yǎng)板中鋪板并培養(yǎng)細胞（每孔100 ?L）。建議實驗重復進行兩次或三次。實驗可以在貼壁細胞或懸浮細胞上進行。細胞數量可以根據細胞類型有所不同，但對于大多數哺乳動物細胞類型，貼壁細胞每孔10,000至40,000個細胞，懸浮細胞每孔40,000至160,000個細胞是合適的。

- 除了測試樣本外，還必須包括未處理細胞的額外孔（對照組）和用Tergitol處理的細胞孔（完全裂解組）。向樣本孔中加入10 ?L測試化合物，向對照組孔中加入10 ?L去離子水，向完全裂解對照組孔中加入10 ?L提供的Tergitol，然后在37°C下孵育細胞10分鐘至過夜。

示例：

- 劑量反應：PANC-1細胞以每孔20,000個細胞的密度接種，并過夜沉降。測試化合物（Triton X-100、皂甙、Tween 20）在完全培養(yǎng)基（RPMI1640，10% FBS）中稀釋，并與細胞共同孵育4小時。通過檢測培養(yǎng)基中LDH的釋放增加來評估測試化合物的細胞毒性。

- 時間反應：PANC-1細胞以每孔20,000個細胞的密度接種，并過夜沉降。將0.025% Triton X-100在完全培養(yǎng)基中稀釋后，在適當的時間加入細胞。通過檢測培養(yǎng)基中LDH的釋放增加來評估測試化合物的細胞毒性。

文獻參考：

1. Vergis, J et al (2021). Exploring Galleria mellonella larval model to evaluate antibacterial efficacy of Cecropin A (1-7)- Melittin against multidrug resistant enteroaggregative Escherichia coli. Pathogens and Disease, ftab010.

2. Zhou, et al (2019). Retrospective analysis of the efficacy of adjuvant CIK cell therapy in epithelial ovarian cancer patients who received postoperative chemotherapy. OncoImmunology, 8(2), e1528411.

3. Flage, B. (2018). Heme-induced acute lung injury by inflammasome activation in vascular endothelium (Doctoral dissertation, University of Pittsburgh).

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術生物技術公司，專注于研發(fā)、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發(fā)現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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