這種均相實(shí)驗(yàn)僅需簡單地向細(xì)胞培養(yǎng)物中加入單一試劑——CellQuanti-Blue 試劑，經(jīng)過孵育步驟后，測量熒光強(qiáng)度（激發(fā)波長 = 530 - 570 nm，發(fā)射波長 = 590 - 620 nm）。CellQuanti-Blue 試劑與其他基于還原酶的實(shí)驗(yàn)（如Alamar Blue試劑）類似，利用了非熒光的還原酶染料Resazurin。這種染料在代謝活躍的細(xì)胞還原作用下，會轉(zhuǎn)化為一種高熒光產(chǎn)物（Resorufin）。活細(xì)胞能夠輕易還原這種無毒試劑，而由此產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度增加可以方便地通過熒光分光光度計(jì)或平板讀數(shù)器進(jìn)行監(jiān)測。非活性細(xì)胞沒有代謝能力，因此不會還原這種染料。因此，該實(shí)驗(yàn)中觀察到的熒光強(qiáng)度是活細(xì)胞數(shù)量的真實(shí)反映。

CellQuanti-Blue 試劑經(jīng)過優(yōu)化，具有最高的靈敏度、重復(fù)性和較長的保質(zhì)期。這種均相細(xì)胞實(shí)驗(yàn)可以在多孔板中進(jìn)行。該試劑與所有培養(yǎng)基和高通量篩選應(yīng)用中的液體處理系統(tǒng)兼容，適用于96孔和384孔板。應(yīng)用范圍包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性檢測和細(xì)胞凋亡。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品CellQuanti Blue 細(xì)胞活力測定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)：

- 安全。非放射性實(shí)驗(yàn)（與H-胸苷摻入實(shí)驗(yàn)相比）。

- 靈敏且準(zhǔn)確。低至100個(gè)細(xì)胞可以被準(zhǔn)確定量。

- 節(jié)省時(shí)間。在96孔和384孔板中進(jìn)行的高通量實(shí)驗(yàn)允許每天同時(shí)處理數(shù)萬個(gè)樣本。

- 均相且便捷。單一試劑，“混合-孵育-測量”型實(shí)驗(yàn)。無需洗滌和試劑轉(zhuǎn)移步驟。

- 穩(wěn)定且適用于高通量篩選（HTS）：在96孔和384孔板中，Z'因子通常為0.6到0.9。可以輕松在HTS液體處理系統(tǒng)上自動化操作。

應(yīng)用：

- 細(xì)胞增殖：細(xì)胞因子、生長因子、營養(yǎng)物質(zhì)的影響。

- 細(xì)胞毒性與凋亡：評估毒性化合物、抗癌抗體、毒素、環(huán)境污染物等。

- 藥物發(fā)現(xiàn)：抗癌藥物的高通量篩選。

儲存條件：試劑盒在室溫下運(yùn)輸。CellQuanti-Blue 試劑對光敏感，應(yīng)存放在提供的棕色瓶中，于4°C保存。對照試劑在-20°C下穩(wěn)定。保質(zhì)期：收到后12個(gè)月。

注意事項(xiàng)：試劑僅供研究使用。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)注意事項(xiàng)。請參考材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細(xì)信息。

實(shí)驗(yàn)步驟：

CellQuanti-Blue 實(shí)驗(yàn)基于代謝活躍的細(xì)胞將非熒光試劑轉(zhuǎn)化為熒光產(chǎn)物。對于大多數(shù)細(xì)胞，這種還原反應(yīng)需要1到5小時(shí)。然后在熒光微孔板讀數(shù)器上定量產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度。盡管大多數(shù)培養(yǎng)基中含有酚紅，但酚紅不會干擾該實(shí)驗(yàn)。技術(shù)說明中的所有數(shù)據(jù)均在含有酚紅的培養(yǎng)基中獲得。

一般注意事項(xiàng)：

- 孵育時(shí)間：孵育時(shí)間取決于細(xì)胞系。某些細(xì)胞系表現(xiàn)出較強(qiáng)的代謝活性，因此比代謝活性較低的細(xì)胞系需要更短的孵育時(shí)間。可以通過多次讀取平板（例如，在加入CellQuanti-Blue 試劑后每30分鐘讀取一次）來輕松確定孵育時(shí)間。一般來說，孵育1到5小時(shí)是足夠的。長時(shí)間孵育（如超過18小時(shí)）可能導(dǎo)致高細(xì)胞數(shù)量時(shí)熒光響應(yīng)非線性。

- 細(xì)胞數(shù)量：通常優(yōu)化后的CellQuanti-Blue 試劑對培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量表現(xiàn)出較寬范圍的線性熒光響應(yīng)。建議通過細(xì)胞稀釋法確定每孔細(xì)胞數(shù)量，以獲得最高的信噪比。可以通過細(xì)胞稀釋法輕松確定最佳細(xì)胞數(shù)量。

- 對照組：雖然不是必需的，但可以運(yùn)行一種細(xì)胞毒性或促進(jìn)細(xì)胞增殖的陽性對照。皂甙是一種細(xì)胞毒性洗滌劑，可從BioAssay Systems獲得（見技術(shù)說明中的圖2）。每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行空白對照，即不含細(xì)胞的培養(yǎng)基或含有0.1%皂甙的細(xì)胞。空白對照用于確定背景熒光，該值必須從數(shù)據(jù)分析中減去。

技術(shù)說明：

CellQuanti-Blue 實(shí)驗(yàn)試劑盒經(jīng)過特別優(yōu)化和配方調(diào)整，以提供一種靈敏、便捷且穩(wěn)定的細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測實(shí)驗(yàn)。試劑盒的關(guān)鍵特點(diǎn)如下：

- 安全。非放射性實(shí)驗(yàn)（與H-胸苷摻入實(shí)驗(yàn)相比）。

- 靈敏且準(zhǔn)確。低至100個(gè)細(xì)胞可以被準(zhǔn)確定量。

- 節(jié)省時(shí)間。在96孔和384孔板中進(jìn)行的高通量實(shí)驗(yàn)允許同時(shí)處理大量樣本。

- 均相且便捷。單一試劑，“混合-孵育-測量”型實(shí)驗(yàn)。無需洗滌和試劑轉(zhuǎn)移步驟。

- 穩(wěn)定且適用于高通量篩選（HTS）。在96孔和384孔板中，Z'因子通常為0.6到0.9。可以輕松在HTS液體處理系統(tǒng)上自動化操作。

示例：

圖1. CellQuanti-Blue 熒光與細(xì)胞數(shù)量的線性關(guān)系。HEK293細(xì)胞在384孔板中進(jìn)行稀釋，并用CellQuanti-Blue 試劑處理。熒光強(qiáng)度與細(xì)胞數(shù)量呈線性關(guān)系（R? = 0.999）。從空白對照中估算的檢測限為100個(gè)細(xì)胞。

圖2. HEK293細(xì)胞中皂甙的劑量依賴性細(xì)胞毒性。HEK293細(xì)胞以每孔15,000個(gè)細(xì)胞（40 ?L）的密度鋪板。細(xì)胞用不同濃度的皂甙處理。過夜培養(yǎng)后，加入5 ?L CellQuanti-Blue 試劑（實(shí)心圓圈）。Alamar Blue（空心圓圈）也進(jìn)行了對比測試。經(jīng)過3小時(shí)孵育后，使用Molecular Devices LJL Analyst測量熒光強(qiáng)度。數(shù)據(jù)代表平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差（n = 3）。皂甙的IC??值分別為：CellQuanti-Blue （信號：背景 = 4.8倍）為0.0016 wt%，Alamar Blue（信號：背景 = 3.3倍）為0.0017 wt%。

文獻(xiàn)參考：

1. Kelley, KD et al (2010). YPEL3, a p53-regulated gene that induces cellular senescence. Cancer Res. 70(9):3566-75.

2. Wang T, et al (2010). Activated T-cells inhibit neurogenesis by releasing granzyme B: rescue by Kv1.3 blockers. J Neurosci. 30(14):5020-7.

3. Heminger K, et al (2009). Alterations in gene expression and sensitivity to genotoxic stress following HdmX or Hdm2 knockdown in human tumor cells harboring wild-type p53. Aging 1(1):89-108.

4. Desplats, PA et al (2008). Functional roles for the striatal-enriched transcription factor, Bcl11b, in the control of striatal gene expression and transcriptional dysregulation in Huntington's disease. Neurobiol Dis.31(3):298-308. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。