2,2'-聯(lián)氮-雙-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（ABTS?）是一種綠色的陽離子自由基，被還原時會恢復到無色狀態(tài)。ABTS實驗被廣泛用于測量抗氧化能力，即食品和生物系統(tǒng)中的氧化還原分子清除自由基的能力。BioAssay Systems的ABTS抗氧化實驗通過測量ABTS自由基被還原和從綠色褪色為透明時發(fā)生的吸光度變化來實現(xiàn)。在650 nm處的吸光度降低與抗氧化劑濃度成正比，并與特羅洛克斯（Trolox）抗氧化標準曲線進行比較。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品抗氧化測定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 快速便捷。5分鐘的試劑孵育時間允許快速樣本檢測。

- 適應性強。與水相和乙醇提取的樣本兼容，穩(wěn)定的信號允許延長運行時間（長達2小時）。

- 高通量。均相“混合-孵育-測量”型實驗。可以輕松自動化，每天檢測數(shù)千個樣本。

應用：

用于定量檢測食品、飲料和尿液樣本中的抗氧化能力。

試劑盒內(nèi)容（96孔板100次測試）：

- ABTS試劑：20 mL

- 3% H?O?：20 ?L

- 特羅洛克斯標準品：100 ?L

- 過氧化氫酶（HRP）：100 ?L

儲存條件：試劑盒在室溫下運輸。收到后將所有組分儲存于-20°C。保質(zhì)期：收到后6個月。

注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規(guī)注意事項。請參考材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細信息。

實驗步驟：

樣本準備：避免使用洗滌劑和還原劑（DTT、2-巰基乙醇、谷胱甘肽等）。

- 植物或食品提取物：將樣本在水相或乙醇溶液中勻漿。如果提取液為酸性或堿性，應在檢測前將樣本中和。如果樣本含有顆粒或渾濁，離心后使用澄清的上清液進行檢測。

- 尿液：根據(jù)水分水平，將尿液樣本稀釋5到20倍。對于未知樣本，建議測試幾種稀釋度以確定最佳樣本稀釋因子（n）。

試劑準備：將所有組分恢復至室溫，并在檢測前短暫渦旋混合。

96孔板操作步驟：

1. 標準品準備：將16 ?L特羅洛克斯標準品（50 mM）與984 ?L去離子水或樣本制備液（例如乙醇）混合，制備1000 ?L 800 ?M預混液。按照表中描述在1.5-mL離心管中稀釋標準品。將20 ?L標準品分別轉(zhuǎn)移到透明平底96孔板的單獨孔中。

2. 將每個樣本的20 ?L分別轉(zhuǎn)移到單獨的孔中。

3. 通過混合2 ?L 3% H?O?和86 ?L去離子水制備20 mM H?O?。注意：20 mM H?O?不穩(wěn)定，每次檢測時需現(xiàn)配。

4. 為所有標準品和樣本孔準備足夠的工作試劑（WR）：對于每個孔，混合190 ?L ABTS試劑、1 ?L 20 mM H?O?和1 ?L HRP。首先混合ABTS試劑和H?O?，然后加入HRP。短暫混合后在室溫下孵育5分鐘。

5. 向所有樣本和標準品孔中加入180 ?L工作試劑。輕輕敲擊平板，充分混合。如果觀察到一些渾濁，持續(xù)敲擊平板直至溶解。

6. 在30分鐘或更長時間（<2小時）后，在650 nm處讀取吸光度。

需要但未提供的材料：

移液裝置及配件（例如多通道移液器）、透明平底96孔板（例如VWR貨號82050-760）、離心管、平板讀數(shù)器以及樣本提取所需材料。

左圖：特羅洛克斯標準曲線；右圖：樣本使用標準協(xié)議進行檢測。

文獻參考：

1. Garc?a-Alonso, et al. (2004). Evaluation of the antioxid ? ant properties of fruits. Food chemistry, 84(1), 13-18.

2. Gupta, D. (2015). Methods for determination of antioxidant capacity: A review. International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 6(2), 546.

3. Niki, E. (2010). Assessment of antioxidant capacity in vitro and in vivo. Free Radical Biology & Medicine, 49(4), 503-515. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術生物技術公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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