乙酰膽堿酯酶（EC 3.1.1.7，AChE），也稱為紅細(xì)胞膽堿酯酶，主要存在于血液和神經(jīng)突觸中。血清膽堿酯酶活性降低可能與接觸殺蟲(chóng)劑或某些變異基因型有關(guān)。AChE催化神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿水解為膽堿和乙酸，這一反應(yīng)對(duì)于膽堿能神經(jīng)元在激活后恢復(fù)到靜息狀態(tài)是必需的。細(xì)胞和血漿中的膽堿酯酶水平被用作評(píng)估與有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑接觸和暴露的安全預(yù)防措施的依據(jù)，以及確定工人是否需要從接觸這些殺蟲(chóng)劑的區(qū)域撤離的依據(jù)。

簡(jiǎn)單、直接且適合自動(dòng)化的檢測(cè)乙酰膽堿酯酶（AChE）活性的程序是非常理想的。BioAssay Systems的QuantiChrom?乙酰膽堿酯酶檢測(cè)試劑盒基于改進(jìn)的Ellman方法，其中乙酰膽堿酯酶作用產(chǎn)生的硫醇膽堿與5,5'-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）形成黃色物質(zhì)。在412 nm處測(cè)量的產(chǎn)物顏色強(qiáng)度與樣本中的酶活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品乙酰膽堿酯酶試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

應(yīng)用：直接檢測(cè)血液、血清、血漿和其他生物樣本中的乙酰膽堿酯酶活性。評(píng)估乙酰膽堿酯酶抑制劑。

儲(chǔ)存條件：試劑盒在室溫下運(yùn)輸。收到后將所有試劑儲(chǔ)存于室溫。保質(zhì)期：收到后6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：試劑僅供研究使用。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)注意事項(xiàng)。請(qǐng)參考材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細(xì)信息。

實(shí)驗(yàn)步驟：

樣本準(zhǔn)備：

- 血液樣本應(yīng)在檢測(cè)緩沖液中稀釋40倍，例如準(zhǔn)確移取5 ?L血液并充分混合于195 ?L檢測(cè)緩沖液中。

- 組織或細(xì)胞裂解液通過(guò)在0.1M磷酸鹽緩沖液（pH 7.5）中短暫超聲或勻漿制備，隨后以14,000 rpm離心5分鐘。使用上清液進(jìn)行檢測(cè)。

- 最好使用新鮮樣本進(jìn)行檢測(cè)。如果無(wú)法做到，應(yīng)將樣本冷藏，并在24小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。

試劑準(zhǔn)備：工作試劑應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，并在30分鐘內(nèi)使用。每個(gè)反應(yīng)孔需要2 mg試劑。根據(jù)所需量稱取相應(yīng)重量（mg）的試劑于離心管中。每2 mg試劑加入200 ?L檢測(cè)緩沖液。渦旋溶解。

實(shí)驗(yàn)操作：

1. 校準(zhǔn)液：將200 ?L水和200 ?L校準(zhǔn)液分別加入透明底部96孔板的孔中。

- 樣本：在單獨(dú)的孔中每孔加入10 ?L樣本。

2. 反應(yīng)：將190 ?L新制備的工作試劑加入所有樣本孔中，輕輕敲擊平板以混合均勻。

- 在平板讀數(shù)器上分別于2分鐘和10分鐘讀取412 nm的吸光度。

3. 計(jì)算：乙酰膽堿酯酶活性按以下公式計(jì)算：

其中OD10和OD2是樣品在10℃下的OD412nm值分別為1分鐘和2分鐘。ODCAL和ODH2O是OD412nm10分鐘時(shí)校準(zhǔn)器和水的值。n是稀釋系數(shù)（全血n=40）。數(shù)字“200”是等價(jià)的校準(zhǔn)品在測(cè)定條件下的活性。

注意：如果未考慮稀釋倍數(shù)的AChE活性高于600 U/L，需用檢測(cè)緩沖液進(jìn)一步稀釋樣本并重復(fù)檢測(cè)。將結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

單位定義：在檢測(cè)條件下（pH 7.5和室溫），每分鐘催化產(chǎn)生1 ?mol硫醇膽堿的酶量為1個(gè)單位。

主要特點(diǎn)：

- 靈敏且準(zhǔn)確。96孔板檢測(cè)中乙酰膽堿酯酶活性的檢測(cè)范圍為10到600 U/L。

- 便捷。操作流程包括加入單一工作試劑，并在室溫下分別于2分鐘和10分鐘讀取吸光度。

- 高通量。可以輕松作為高通量96孔板檢測(cè)，每天檢測(cè)數(shù)千個(gè)樣本。

試劑盒內(nèi)容（96孔板100次測(cè)試）：

- 檢測(cè)緩沖液（pH 7.5）：30 mL

- 試劑：240 mg

- 校準(zhǔn)液：4 mL（相當(dāng)于200 U/L）

示例：

使用96孔板協(xié)議對(duì)兩份人血樣本進(jìn)行雙份檢測(cè)。AChE活性分別為3,402 ± 163和3,660 ± 151 U/L。

在96孔板中0-1000 U/L乙酰膽堿酯酶反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)。

0-1000U/L乙酰膽堿酯酶在96孔板中的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)

文獻(xiàn)參考：

1. Ketenci, S. et al (2020). The neurochemical effects of prazosin treatment on fear circuitry in a rat traumatic stress model. Clinical Psychopharmacology and Neuroscience, 18(2), 219-230.

2. Hafiz, Z. Z., et al (2020). Inhibitory effects of raw-extract centella asiatica (Reca) on acetylcholinesterase, inflammations, and oxidative stress activities via in vitro and in vivo. Molecules (Basel,Switzerland), 25(4).

3. Voorhees, J. R., et al (2019). Occupational-like organophosphate exposure disrupts microglia and accelerates deficits in a rat model of Alzheimer 's disease. NPJ Aging and Mechanisms of Disease,5, 3. 

BioAssay Systems是一家位于美國(guó)北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開(kāi)發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長(zhǎng)的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過(guò)50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了超過(guò)250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽(yáng)離子檢測(cè)。

作為BioAssay Systems在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。