BioAssay Systems 亮氨酸氨肽酶測定試劑盒-使用96孔板的操作步驟

亮氨酸氨基肽酶（LAP）（E.C 3.4.11.1）是一種在肝細胞和腸細胞中常見的酶，能夠從蛋白質和多肽的N-末端水解亮氨酸。LAP的表達在損傷和免疫反應中會增加，因此血清樣本中LAP活性的增加可能表明潛在的肝損傷、腫瘤發生或炎癥。

BioAssay Systems的LAP活性測定試劑盒提供了一種便捷的比色法，用于測定生物樣本中的LAP活性。在此測定中，LAP水解一種與染料結合的亮氨酸底物，產生一種可在405nm處測量的黃色產物。20分鐘內405nm處吸光度的增加（?OD）與LAP活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品亮氨酸氨肽酶測定試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 靈敏且準確。 最少可使用10 uL樣本。96孔板的線性檢測范圍為0.025至250 U/L。

- 快速且便捷。 操作過程僅涉及加入單一工作試劑并孵育20分鐘。測定可在室溫或37°C下進行。

- 高通量。 均質“混合-孵育-測量”型測定。可輕松自動化，每天可測定數千個樣本。

應用領域：

- 定量測定生物樣本（例如細胞、組織和血清樣本）中的LAP酶活性。

- 高通量篩選LAP抑制劑并評估藥物調節劑。

試劑盒組成（96孔板100次測試）：

- 測定緩沖液：20 mL

- 底物：100 uL

- 標準品：50 uL

儲存條件：試劑盒在室溫下運輸。收到后將所有組分儲存于-20°C。保質期：收貨后6個月。

注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規注意事項。請參閱材料安全數據表以獲取詳細信息。

操作步驟：

樣本準備：

- 組織：在勻漿前，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）沖洗組織以去除血液。將組織（50 mg）在含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的緩沖液中勻漿。在4°C下以10,000 x g離心15分鐘。取上清液用于測定。

- 細胞裂解液：通過在4°C下以2,000 x g離心5分鐘收集細胞。對于貼壁細胞，不要使用蛋白酶來收獲細胞，而是使用橡膠刮刀。在含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的冷緩沖液中適當體積中勻漿或超聲處理細胞。在4°C下以14,000 x g離心10分鐘。取上清液用于測定。

- 對于未知樣本，建議測試幾種稀釋度以確定最佳樣本稀釋因子n。

使用96孔板的操作步驟：

1. 標準品。將10 uL提供的100 mM標準品與240 uL去離子水混合，制備250 uL 4 mM預混液。按照表格描述在0.5-mL離心管中稀釋標準品。將10 uL標準品分別加入到96孔透明平底板的單獨孔中。未使用的標準品可以冷凍保存以供日后使用。

- 向標準品孔中加入190 uL測定緩沖液。

2. 將每個樣本的10 uL分別轉移到單獨的孔中。

3. 制備足夠所有樣本孔的工作試劑（WR）。對于每個孔，混合1 uL底物溶液和195 uL測定緩沖液。建議現配現用。

4. 向每個樣本孔中加入190 uL WR。輕輕但徹底地輕敲板以混勻。

5. 立即在0分鐘和20分鐘時讀取405nm處的吸光度。

所需材料（未提供）：

- LAP酶（例如Sigma，貨號L6007）、移液裝置及配件（例如多通道移液器）、96孔透明平底板（例如VWR貨號82050-760）、離心管和酶標儀。

示例：

使用96孔方案對生物樣本進行了三次分析。HEPG2的LAP活性為2.50±0.37 U/L，MDAMB-231為2.18±0.71 U/L，HeLa細胞裂解液為1.33±0.40 U/L。在血清中，LAP牛血清中的活性為0.61±0.09 U/L，人血清中的為1.28±0.12 U/L大鼠血清中為2.09±0.93U/L。

96孔板測定中的標準曲線

文獻：

1. Grembecka J, Kafarski P. (2001). Leucine aminopeptidase as a target for inhibitor design. Mini Rev Med Chem; 1(2):133-44.

2. Hitzerd SM, Verbrugge SE, Ossenkoppele G, Jansen G, Peters GJ.(2014). Positioning of aminopeptidase inhibitors in next generation cancer therapy. Amino Acids; 46(4): 793-808.

3. Sato, Y. (2003). Aminopeptidases and angiogenesis. Endothelium;10(6): 287-90. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。