蛋白質(zhì)磷酸化在細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)活性中發(fā)揮關(guān)鍵作用。 已知大量的蛋白激酶和磷酸酶參與多種信號傳導(dǎo)通路。在生命科學(xué)研究和藥物發(fā)現(xiàn)中，能夠監(jiān)測這些信號傳導(dǎo)通路、目標(biāo)蛋白磷酸化狀態(tài)以及藥物效應(yīng)的快速檢測方法是非常受歡迎的。

4E結(jié)合蛋白1（4EBP1，4E-BP1，EIF4EBP1，BP-1，PHAS-I）是一種真核翻譯起始因子，它在響應(yīng)包括紫外線照射和胰島素信號等多種信號時發(fā)生磷酸化，從而激活mRNA翻譯。 BioAssay Systems的4EBP1(S65)磷酸化ELISA試劑盒提供了一種快速靈敏的檢測方法，用于測量培養(yǎng)細(xì)胞中的磷酸化蛋白p4EBP1(S65)，并將磷酸化水平與同一孔中的總蛋白含量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。這種簡單高效的檢測方法無需制備細(xì)胞裂解液，可用于研究潛在的信號通路以及抑制劑、siRNA或激活劑對通路的影響。在該檢測中，生長在96孔板中的細(xì)胞被固定和通透化。使用特異性一抗和辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的二抗以及熒光底物來測量4EBP1(S65)的磷酸化，并使用熒光試劑在同一孔中測量總蛋白。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品【干冰】EnzyFluo人/小鼠4EBP1（S65）磷酸化ELISA試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)：

新改進(jìn)版。總檢測時間從標(biāo)準(zhǔn)的21小時縮短至6.5小時（實(shí)際操作時間2.5小時）。

簡單便捷。細(xì)胞直接在96孔板中培養(yǎng)，無需細(xì)胞裂解。

準(zhǔn)確且高通量。蛋白質(zhì)磷酸化水平與同一孔中的總細(xì)胞蛋白進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，極大地減少了孔間差異。可輕松自動化作為高通量96孔板檢測方法，每天可處理數(shù)千個樣本。

應(yīng)用：

用于測定完整細(xì)胞中4EBP1(S65)的磷酸化狀態(tài)以及評估激活劑、抑制劑、siRNA等對通路的調(diào)節(jié)作用。

已測試物種：人（S65）、小鼠/大鼠（S64）。

試劑盒組成：

洗滌緩沖液原液：25 mL

封閉緩沖液：25 mL

蛋白染色液：6 mL

染料試劑：120 uL

Ab1：10 uL

Ab2（gM-HRP）：10 uL

儲存條件：試劑盒在冰上運(yùn)輸。收貨后，將所有試劑儲存于-20°C。這些試劑的保質(zhì)期約為收貨后6個月。

注意事項(xiàng)：試劑僅供研究使用。使用這些試劑時應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)注意事項(xiàng)。請參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細(xì)信息。

NIH 3T3細(xì)胞中4EBP1(S65)磷酸化的誘導(dǎo)：

將3×10⁴個NIH 3T3細(xì)胞接種于含有100 uL培養(yǎng)基的96孔板中。在37°C下過夜培養(yǎng)后，細(xì)胞用50 ng/mL PDGFbb在無血清培養(yǎng)基中處理。使用E4EBP-100試劑盒檢測4EBP1(S65)的磷酸化。

文獻(xiàn)參考：

1. Cohen, P. (2002). The origins of protein phosphorylation. Nature Cell Biology. 4 (5): E127–130.

2. Smoly, I. et al (2017). An asymmetrically balanced organization of kinases versus phosphatases across Eukaryotes determines their distinct impacts". PLOS Computational Biology. 13 (1): e1005221.

3. Vlastaridis, P. et al (2017). Estimating the total number of phosphoproteins and phosphorylation sites in eukaryotic proteomes.GigaScience. 6 (2): 1–11 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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