己糖激酶（E.C. 2.7.1.1）是一種存在于線粒體和細胞質(zhì)中的酶，是糖酵解途徑中的第一個關(guān)鍵步驟。己糖（主要為葡萄糖）通過ATP磷酸化生成葡萄糖-6-磷酸。己糖激酶與多種人類疾病有關(guān)，包括癌癥和糖尿病。BioAssay Systems的非放射性、比色法己糖激酶檢測方法基于NADPH偶聯(lián)的酶促反應(yīng)，通過還原四氮雜唑鹽MTT生成一種在565 nm處有最大吸收峰的有色產(chǎn)物。在565 nm處吸光度的增加與酶活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品EnzyChrom 己糖激酶測定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

快速且靈敏：線性檢測范圍（20 uL樣本）：15分鐘反應(yīng)時，檢測范圍為0.22至100 U/L。

便捷：均質(zhì)“混合-孵育-測量”型檢測。

高通量：可在高通量篩選液體處理系統(tǒng)上自動化操作，每天可處理數(shù)千個樣本。

應(yīng)用

己糖激酶活性測定：可用于生物樣本（如微生物、血漿、血清、培養(yǎng)細胞、組織和培養(yǎng)基）中的己糖激酶活性測定。

試劑盒內(nèi)容（96孔板，100次檢測）

檢測緩沖液：10 mL

酶A：120 uL

NADP/MTT：1 mL

酶B：120 uL

底物混合液：1 mL

校準液：1 mL

儲存條件

試劑盒在運輸過程中使用冰袋包裝。收到后，請將所有組分儲存于-20°C。保質(zhì)期：收到后6個月。

注意事項

試劑僅供研究使用。使用這些試劑時，請遵循實驗室試劑的常規(guī)注意事項。請參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細信息。

操作步驟

檢測原理：本檢測基于動力學反應(yīng)。為確保孵育時間一致，向樣本中加入工作試劑時應(yīng)迅速，混合應(yīng)簡短但充分。建議使用多通道移液器。檢測可在任何期望的溫度下進行（例如25°C或37°C）。

樣本準備：

血清和血漿：可直接進行檢測。

組織：解剖前，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）沖洗組織以去除血液。將組織（50 mg）在約200 uL含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的緩沖液中均質(zhì)化。在4°C下以10,000 × g離心15分鐘。取上清液進行檢測。

細胞裂解液：通過在4°C下以2,000 × g離心5分鐘收集細胞。對于貼壁細胞，不要使用蛋白酶來收獲細胞，而是使用橡膠刮刀或細胞刮板。在含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的冷緩沖液中適當體積內(nèi)均質(zhì)化或超聲處理細胞。在4°C下以10,000 × g離心15分鐘。取上清液進行檢測。

所有樣本：可在-20至-80°C下儲存至少一個月。

試劑準備：將試劑平衡至期望的反應(yīng)溫度（例如25°C或37°C）。使用前短暫離心試管。通過混合以下成分制備足量的工作試劑（WR），用于所有檢測孔：對于每個96孔檢測，需8 uL底物混合液、8 uL NADP/MTT溶液、1 uL酶A、1 uL酶B和70 uL檢測緩沖液。

文獻參考：

1. De Jesus, A et al (2022) Hexokinase 1 cellular localization regulates the metabolic fate of glucose. Mol. Cell. 82:1261-1277.

2. Patra, KC et al (2013) Hexokinase 2 is required for tumor initiation and maintenance and its systemic deletion is therapeutic in mouse models of cancer. Cancer Cell. 24: 213-228.

3. Wasserman, DH (2022) Insulin, Muscle Glucose Uptake, and Hexokinase:Revisiting the Road Not Taken. Physiology (Bethesda). 37: 115-127. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。