L-肉堿存在于大多數(shù)哺乳動物、植物和某些細菌中。L-肉堿最重要的作用是將長鏈脂肪酸從細胞質轉運到線粒體中進行脂肪酸氧化。BioAssay Systems 的方法提供了一種簡單且高通量的L-肉堿檢測方法。在此檢測中，多步反應產(chǎn)生H2O2，H2O2與特定染料反應生成粉紅色產(chǎn)物。在570nm處的吸光度或在λex/em = 530/585nm處的熒光強度與樣品中L-肉堿的濃度成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品EnzyChrom l-肉堿測定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

靈敏：使用10 uL樣本。檢測范圍：比色法檢測為12 1000 uM，熒光法檢測為1 100 uM L-肉堿。

便捷：室溫下的“混合 孵育 讀取”程序可輕松自動化，每天可進行數(shù)千個樣本的高通量檢測。

應用

檢測：尿液、血清、血漿、細胞裂解液、組織裂解液和食品（如牛奶）中的L-肉堿。

試劑盒組成

檢測緩沖液：10 mL

染料試劑：120 uL

酶A：干粉

酶B：100 uL

酶C：100 uL

標準品：50 uL

底物混合液：400 uL

儲存條件

試劑盒在運輸過程中使用冰袋包裝。將所有組分存放在-20℃。有效期：自收到之日起六個月。

注意事項

試劑僅供研究使用。使用試劑時需遵循實驗室試劑的常規(guī)安全措施。請參閱安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細信息。

操作步驟

試劑準備

通過向酶A管中加入120 uL去離子水復溶酶A。通過上下移液確保酶A完全溶解，并在室溫下孵育15分鐘。將復溶后的酶A存放在-20℃，并在2個月內使用。

樣本準備

血清、血漿和牛奶應通過高氯酸：氫氧化鉀沉淀法（見下文）進行澄清。血清和血漿應使用內標物稀釋不超過1:5。細胞裂解液可直接檢測。牛奶可以直接測量，也可以使用內標物。

對于高氯酸：氫氧化鉀澄清法，向100 uL樣本中加入10 uL 60%的高氯酸，充分混合后以14,000 rpm離心5分鐘。向100 uL上清液中加入40 uL 2 M KOH，置于冰上沉淀，然后以14,000 rpm離心2分鐘收集上清液。稀釋因子n為1.54。

注意：含有巰基（SH）的試劑（例如β-巰基乙醇或二硫蘇糖醇，> 5 uM）、疊氮化鈉、EDTA和十二烷基硫酸鈉已知會干擾此檢測，應在樣本準備中避免使用。

實例

PANC-1細胞裂解液樣本直接在0.99 mg/mL的蛋白質濃度下進行檢測。計算出的L-肉堿濃度為23.2 ± 5.2 nmol/mg總蛋白。人血清和全脂牛奶使用高氯酸：氫氧化鉀沉淀法和內標物方法進行檢測。L-肉堿濃度分別為46.3 ± 5.9 uM（人血清）和313.7 ± 85.1 uM（全脂牛奶）。

文獻參考：

1. Pekala J, et al. (2011). L-carnitine-metabolic functions and meaning in human life. Curr. Drug Metab. 12:667-78

2. Almannai M, et al. (1980). Carnitine inborn errors of metabolism.Molecules. 24: 3251-3267.

3. Longo N, et al. (2016). Carnitine transport and fatty acid oxidation.Biochim Biophys Acta. 1863:2422-35. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術生物技術公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。