精氨酸酶（L-精氨酸脲水解酶，EC 3.5.3.1）存在于哺乳動(dòng)物和植物中。在人類中，精氨酸酶主要在肝臟中表達(dá)，也在乳腺、腎臟、睪丸、唾液腺、表皮和紅細(xì)胞中少量表達(dá)。精氨酸酶催化精氨酸轉(zhuǎn)化為鳥氨酸和尿素，這一過程對(duì)于抵御氨（NH?）毒性以及細(xì)胞生長(zhǎng)和修復(fù)至關(guān)重要。過度的精氨酸酶活性與心血管疾病有關(guān)，還可能導(dǎo)致血管結(jié)構(gòu)問題和神經(jīng)毒性。研究表明，精氨酸酶抑制劑在心血管疾病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療中已被證明具有益處。

在研究和藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域，用于測(cè)量精氨酸酶抑制的簡(jiǎn)單、直接且適合自動(dòng)化的程序非常受歡迎。BioAssay Systems的精氨酸酶抑制劑篩選試劑盒提供了一種靈敏且便捷的方法來篩選精氨酸酶抑制劑。該方法利用一種顯色劑，該顯色劑能與精氨酸酶反應(yīng)中產(chǎn)生的尿素特異性地形成有色復(fù)合物。顏色的強(qiáng)度與樣本中的精氨酸酶活性成正比。通過比較經(jīng)測(cè)試化合物預(yù)孵育的反應(yīng)與未經(jīng)處理的對(duì)照反應(yīng)的顏色強(qiáng)度，可以確定測(cè)試化合物的抑制百分比。

作為BioAssay Systems在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品精氨酸酶抑制劑篩選試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)：

- 安全：非放射性測(cè)定。

- 高通量：均質(zhì)“混合-孵育-測(cè)量”型測(cè)定，可輕松在高通量篩選液體處理系統(tǒng)上自動(dòng)化操作。

- 快速可靠：可在不到2小時(shí)內(nèi)完成，無需37攝氏度加熱器。

應(yīng)用范圍：

- 高通量篩選精氨酸酶抑制劑并評(píng)估其效果。

試劑盒組成（96孔板，100次測(cè)試）：

- 精氨酸緩沖液（pH 9.5）：1毫升

- 錳溶液：300微升

- 試劑A：12毫升

- 試劑B：12毫升

儲(chǔ)存條件：

- 試劑盒在室溫下運(yùn)輸。將精氨酸緩沖液儲(chǔ)存于-20攝氏度，其他組分儲(chǔ)存于2-8攝氏度。有效期：收到后12個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)預(yù)防措施。請(qǐng)參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細(xì)信息。

操作步驟：

- 在測(cè)定前將所有試劑平衡至室溫。底物緩沖液和尿素試劑應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，并在2小時(shí)內(nèi)使用完畢。

- 該測(cè)定基于酶催化的動(dòng)力學(xué)反應(yīng)。為確保孵育時(shí)間一致，加入工作試劑的操作應(yīng)迅速，混合應(yīng)簡(jiǎn)短但徹底。建議使用多通道移液器。注意：試劑盒中未包含精氨酸酶或?qū)φ找种苿?/p>

樣本準(zhǔn)備：

- 將測(cè)試化合物溶解于所選溶劑中。建議先測(cè)試所選酶對(duì)溶劑的耐受性。

- 以下協(xié)議針對(duì)人精氨酸酶I進(jìn)行了優(yōu)化。使用去離子水將純化的精氨酸酶稀釋至0.0012 U/微升。如果分析其他物種，建議您通過實(shí)驗(yàn)確定Km值，然后調(diào)整底物緩沖液中的精氨酸緩沖液體積，使50微升反應(yīng)中的底物最終濃度接近Km值。

精氨酸酶反應(yīng)準(zhǔn)備：

1. 將40微升精氨酸酶分別加入不同的孔中。

2. 保留兩個(gè)含有精氨酸酶的孔，一個(gè)用于空白，一個(gè)用于對(duì)照。

3. 向?qū)φ蘸涂瞻卓字屑尤?微升測(cè)試化合物所溶解的溶劑。例如，如果測(cè)試化合物溶解于100體積百分比（v/v%）的DMSO中，則向這些孔中加入5微升100體積百分比（v/v%）的DMSO。

4. 向其余含有精氨酸酶的孔中加入5微升測(cè)試化合物。輕拍孔板以混合。

5. 在25攝氏度下孵育孔板15分鐘。

6. 通過混合為每個(gè)孔準(zhǔn)備足夠的底物緩沖液（SB）：4微升精氨酸緩沖液和2微升錳溶液。向所有樣本孔（除空白孔外）中加入5微升SB。向空白孔中加入5微升去離子水。輕拍孔板以混合。在25攝氏度下孵育孔板30分鐘。

7. 尿素測(cè)定：通過混合等體積的試劑A和試劑B來準(zhǔn)備尿素試劑。向所有孔中加入200微升尿素試劑。（注意：尿素試劑可終止精氨酸酶反應(yīng)。）輕拍孔板以混合。在室溫下孵育60分鐘，并在430納米處讀取吸光度。

人精氨酸酶I與100體積百分比（v/v%）DMSO中的不同濃度的ABH共同孵育（在50微升反應(yīng)中最終DMSO濃度為10體積百分比（v/v%））。

文獻(xiàn)參考：

1. Segal, Robert, et al. (2012) Chronic oral administration of the arginase inhibitor 2 (S)-amino-6-boronohexanoic acid (ABH) improves erectile function in aged rats. Journal of andrology 33.6: 1169-1175.

2. Di Costanzo, Luigi, et al. (2005) Crystal structure of human arginase I at 1.29-? resolution and exploration of inhibition in the immune response.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 102.37: 13058-13063.

3. Pham, T. N., et al. (2016) Arginase inhibitors: from chlorogenic acid to cinnamides. Planta Medica 81.S01: P482

BioAssay Systems是一家位于美國(guó)北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長(zhǎng)的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測(cè)。

作為BioAssay Systems在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。