蛋白質或肽被稱為“生命的基石”，是生命科學中最重要的大分子之一。蛋白質測定是一種非常常見的操作。用于測量蛋白質或肽濃度的簡單、直接且易于自動化的操作流程是非常理想的。BioAssay Systems的QuantiFluo?蛋白質檢測試劑盒基于改進的鄰苯二甲醛法。該試劑與蛋白質或肽中的伯胺反應，形成一種藍色熒光產物，能夠檢測納克級別的蛋白質。熒光強度（λex/em = 360/450 nm）與樣本中的蛋白質濃度成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品蛋白質測定試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

- 快速且靈敏。檢測過程僅需幾分鐘。以牛血清白蛋白（BSA）為標準，線性檢測范圍為1.3 - 1000 g/mL。

- 兼容裂解緩沖液。這種改進和優(yōu)化的單一試劑可直接與各種裂解緩沖液配合使用。非常適合用于測定細胞或組織裂解液中的蛋白質濃度。

- 方便且高通量。均質的“混合-孵育-測量”型檢測。無需洗滌和試劑轉移步驟。可以輕松在高通量篩選（HTS）液體處理系統(tǒng)上自動化，每天可處理數(shù)千個樣本。

應用領域

- 用于定量測定各種生物樣本中的蛋白質。

試劑盒組成

- 試劑：20 mL

- 標準品：100 L（20 mg/mL BSA）

儲存條件

- 本產品在室溫下運輸。長期儲存時，請將試劑盒置于-20°C。有效期為收到后6個月。

注意事項

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規(guī)注意事項。請參考材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細信息。

96孔板讀取器的檢測步驟

注意：

1. 本檢測與大多數(shù)洗滌劑、螯合劑和緩沖液成分兼容。如果可能的話，應避免使用含有伯胺的緩沖液（例如Tris、甘氨酸）。為了獲得最佳結果，請在標準品和空白中包含與樣本相同濃度的緩沖液。

2. 如果樣本蛋白質濃度高于1000 g/mL，請用水稀釋樣本并重復檢測。將結果乘以稀釋倍數(shù)。

使用黑色平底96孔板。檢測前，將所有試劑恢復至室溫。

樣本準備

- 培養(yǎng)的細胞可以直接在黑色培養(yǎng)板中進行檢測。移除培養(yǎng)基，用1x磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌細胞3次。或者，細胞可以在改良的RIPA裂解緩沖液中均質化，該緩沖液包含：150 mM NaCl、5 mM EDTA（pH 8.0）、10 mM HEPES（pH 7.5）、1% NP-40、0.5% 脫氧膽酸鈉、0.5% SDS。（由于伯胺會增加背景熒光，因此最好避免使用含有Tris或其他伯胺的RIPA緩沖液）。移除培養(yǎng)基后，加入足夠的預熱至95°C的裂解緩沖液以覆蓋整個板（T-75為1-1.5 mL，T-25為500 L）。徹底覆蓋細胞，然后用橡膠刮刀使貼壁細胞脫落。超聲處理直至樣本澄清，然后在95°C下加熱10分鐘。以1800 x g離心5分鐘。如果存在沉淀物，則重復超聲、加熱和離心步驟，直至離心后的樣本不再有沉淀物。

- 組織（20 mg）可以在200 L冰水或裂解緩沖液中均質化，然后以14,000 rpm離心5分鐘。

- 當天未測量的樣本可以冷凍保存于-80°C。

1. 標準品和樣本

- 通過將10 L 20 mg/mL標準品與190 L H2O混合，制備1000 g/mL標準品預混液。按照表格所示，在H2O中稀釋標準品預混液。將10 L標準品分別加入板的不同孔中。

- 將每個樣本的10 L分別加入板的不同孔中。注意：如果細胞或組織裂解液樣本在緩沖液中，則在所有標準稀釋步驟中使用相同濃度的緩沖液代替H2O。

2. 檢測

- 向所有孔中加入90 L試劑。立即輕拍板以混合。在室溫下孵育5分鐘。在360/450 nm處用酶標儀測量熒光強度。最好在混合后相同的時間間隔內讀取所有樣本的熒光強度。

注意：

1. 標準操作步驟中，樣本與試劑的比例為1:9。通過使用更高的樣本體積（例如1:1或5:1），可以實現(xiàn)更高的靈敏度。

2. 對于在384孔板中培養(yǎng)的細胞，向檢測孔中加入40 L試劑。

示例：

文獻參考：

1. Kutchai H, Geddis LM (1977). Determinations of protein in red cell membrane preparations by o-phthalaldehyde fluorescence. Anal Biochem. 77:315-9.

2. Robrish SA, et al (1978). The use of the o-phthalaldehyde reaction as asensitive assay for protein and to determine protein in bacterial cells and dental plaque. Anal Biochem. 84:196-204.

3. Joys TM, Kim H (1979). o-Phthalaldehyde and the fluorogenic detection of peptides. Anal Biochem. 94:371-7.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術生物技術公司，專注于研發(fā)、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。