SuperLight?熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)法基于在哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母或大腸桿菌細(xì)胞中熒光素酶表達(dá)的定量，使用熒光素和ATP作為底物。

反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生發(fā)光，這種發(fā)光可以方便地通過發(fā)光儀進(jìn)行測(cè)量。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)

-高靈敏度和寬檢測(cè)范圍：能夠檢測(cè)低至2飛克（fg）的熒光素酶和少至4個(gè)細(xì)胞。此外，發(fā)光強(qiáng)度在七個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。

-與常規(guī)實(shí)驗(yàn)室和高通量篩選（HTS）格式兼容：檢測(cè)可在試管或微孔板中進(jìn)行，并可使用LJLAnalyst、Berthold發(fā)光儀、Top-Count、MicroBeta計(jì)數(shù)器、化學(xué)發(fā)光成像板讀取器（CLIPR/LeadSeeker）等設(shè)備進(jìn)行測(cè)量。檢測(cè)試劑與所有液體處理系統(tǒng)兼容。

-快速便捷：均質(zhì)“混合即測(cè)”檢測(cè)法可在10分鐘內(nèi)完成熒光素酶水平的檢測(cè)。優(yōu)化組合的試劑系統(tǒng)允許單次添加步驟，并同時(shí)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞裂解和檢測(cè)。

-穩(wěn)健且適用于高通量篩選：在96孔板和384孔板中觀察到的Z'因子為0.6至0.8。可在HTS液體處理系統(tǒng)上輕松自動(dòng)化。

應(yīng)用

-基因調(diào)控：基因表達(dá)水平、啟動(dòng)子活性的特征、受體、轉(zhuǎn)錄因子和小分子對(duì)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)。

-藥物發(fā)現(xiàn)：用于基因調(diào)節(jié)劑的高通量篩選。

儲(chǔ)存條件

試劑盒在常溫下運(yùn)輸。將試劑儲(chǔ)存于提供的棕色瓶中，置于-20°C，檢測(cè)緩沖液儲(chǔ)存于2-8°C。

保質(zhì)期：收到后12個(gè)月。

本協(xié)議可在www.bioassaysys.com在線下載。

注意事項(xiàng)：試劑僅供研究使用。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)注意事項(xiàng)。請(qǐng)參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細(xì)信息。

操作步驟

SuperLight?熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)法基于熒光素/熒光素酶反應(yīng)過程中產(chǎn)生的生物發(fā)光。配制好的試劑經(jīng)過優(yōu)化，將細(xì)胞裂解和檢測(cè)合并為一步。培養(yǎng)基中的酚紅不會(huì)干擾此檢測(cè)。技術(shù)說明中的所有數(shù)據(jù)均在含有酚紅的培養(yǎng)基中獲得。

重要提示：建議在檢測(cè)緩沖液中新鮮配制試劑，盡管配制好的試劑在-20°C下儲(chǔ)存時(shí)可穩(wěn)定長達(dá)4周。

一般注意事項(xiàng)

-孵育時(shí)間：熒光素/熒光素酶反應(yīng)和細(xì)胞裂解速度很快，因此在加入試劑后，哺乳動(dòng)物細(xì)胞（例如HEK293、CHO）通常孵育2至10分鐘就足夠了。

-細(xì)胞數(shù)量：優(yōu)化后的報(bào)告基因檢測(cè)試劑對(duì)熒光素酶非常敏感（檢測(cè)限2飛克），并且在七個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。少至4個(gè)細(xì)胞可以被檢測(cè)到，即使在96孔板中每孔多達(dá)80,000個(gè)細(xì)胞時(shí)，仍可觀察到線性響應(yīng)。為了優(yōu)化檢測(cè)，建議通過細(xì)胞稀釋系列來確定每孔的最佳細(xì)胞數(shù)量。細(xì)胞可以是貼壁培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)。

-細(xì)胞裂解和混合：為了方便起見，將1體積的配制好的試劑加入到1體積的細(xì)胞中，可以實(shí)現(xiàn)充分混合。由于特制的緩沖液能夠瞬間裂解哺乳動(dòng)物細(xì)胞，因此無需額外混合。

示例： 

圖1. SuperLight?熒光素酶檢測(cè)法在384孔板中的線性關(guān)系。  

從空白對(duì)照中估算的檢測(cè)限為2飛克（fg）。發(fā)光強(qiáng)度在2飛克到46納克（ng）之間呈線性關(guān)系。

圖2. 發(fā)射光與HEK293細(xì)胞數(shù)量之間的線性關(guān)系。  

在384孔板檢測(cè)中，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染含有cAMP反應(yīng)元件（CRE）熒光素酶報(bào)告基因構(gòu)建物的HEK293細(xì)胞。檢測(cè)限：4個(gè)細(xì)胞。

圖3. 前列腺素E2（PGE2）和腺苷酸環(huán)化酶激活劑佛手柑素對(duì)CRE依賴性熒光素酶表達(dá)的上調(diào)。  

在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染含有cAMP反應(yīng)元件（CRE）熒光素酶構(gòu)建物的HEK293細(xì)胞中，PGE2的半數(shù)有效濃度（EC50）為0.15微摩爾（?M），佛手柑素的EC50為3.5微摩爾（?M）。

文獻(xiàn)參考：

1. Cohen ME, et al (2011). Antibody against extracellular vaccinia virus (EV) protects mice through complement and Fc receptors. PLoS One.6(6):e20597.

2. Fuller CA, et al (2011). Shiga toxin subtypes display dramatic differences in potency. Infect Immun. 79(3):1329-37.

3. Kulkarni AA, et al (2010). Glycan encapsulated gold nanoparticles selectively inhibit shiga toxins 1 and 2. Bioconjug Chem. 21(8):1486-93.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測(cè)。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。