糖胺聚糖（GAGs）是長鏈線性多糖，是哺乳動物組織細胞外基質(zhì)的主要成分，具有高度負電荷。GAGs在細胞生長、細胞黏附、傷口修復(fù)和抗凝血中發(fā)揮關(guān)鍵作用。它們對大腦發(fā)育和穩(wěn)態(tài)也很重要。GAGs與骨關(guān)節(jié)炎、炎癥、糖尿病、脊髓損傷和癌癥有關(guān)。BioAssay Systems的GAGs檢測試劑盒采用濁度法反應(yīng)，GAGs與試劑中的蛋白質(zhì)形成不溶性復(fù)合物。在600 nm處的濁度增加與樣本中的糖胺聚糖含量（以透明質(zhì)酸當(dāng)量表示）成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品糖胺聚糖測定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 靈敏且準(zhǔn)確。最少可使用40 uL樣本。96孔板的線性檢測范圍：0.01 - 0.5 mg/mL透明質(zhì)酸。

- 快速且便捷。操作過程僅需加入單一工作試劑并孵育10分鐘。室溫檢測，無需37°C孵育器。

- 高通量。均相“混合-孵育-測量”型檢測。可輕松自動化，每天檢測數(shù)千個樣本。

應(yīng)用：

- 用于定量測定食品和組織勻漿中的糖胺聚糖。

試劑盒組成（96孔板，100次檢測）：

- 試劑：16 mL

- 標(biāo)準(zhǔn)品：0.8 mL（0.5 mg/mL透明質(zhì)酸）

儲存條件：  

試劑盒在室溫下運輸。收到后將所有組分儲存于-20°C。有效期：收到后6個月。

注意事項：  

試劑僅供研究使用。使用試劑時應(yīng)遵循實驗室試劑的常規(guī)注意事項。請參考材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細信息。

操作步驟：

限制條件：

1. 與許多濁度法檢測一樣，許多因素（如樣本基質(zhì)成分、非特異性結(jié)合、對溫度和混合的敏感性）可能會影響反應(yīng)動力學(xué)。我們強烈建議每次檢測都運行標(biāo)準(zhǔn)曲線，并且所有樣本都在同一次檢測中進行比較。

2. 不同類型的GAGs可能導(dǎo)致不同的信號強度和標(biāo)準(zhǔn)曲線形狀。本檢測以透明質(zhì)酸當(dāng)量報告結(jié)果，使用透明質(zhì)酸作為GAGs標(biāo)準(zhǔn)。

樣本準(zhǔn)備：

- 組織和其他固體樣本（如食品）：在解剖前，用1X PBS（pH 7.4）沖洗組織樣本以去除血液。按照每毫克組織7.5 uL的比例，將樣本和冰冷的1X PBS（pH 7.4）加入Dounce勻漿器中。我們建議至少使用15 mg樣本，并盡可能保持樣本質(zhì)量一致。使用研杵勻漿20 - 40次（具體次數(shù)取決于樣本類型；在實驗中保持所有樣本的研杵次數(shù)一致）。將勻漿液和任何剩余固體轉(zhuǎn)移到一個新的1.5-mL微量離心管中。用與最初加入的等量PBS沖洗研杵和勻漿器內(nèi)壁；將此沖洗液與勻漿液合并。在冰上超聲處理90秒。以14,000 rpm離心5分鐘。取上清液用于檢測。

注意：陰離子物質(zhì)（如SDS、膽酸鈉等）會干擾檢測，應(yīng)在樣本準(zhǔn)備中避免使用。一些生物樣本（如血清、血漿、尿液和腦脊液）中GAGs的含量太低，無法使用此檢測方法檢測。一些樣本類型（如組織）需要樣本空白（詳見操作步驟）。

- 對于未知樣本，建議測試幾種稀釋度以確定最佳樣本稀釋因子n。

試劑準(zhǔn)備：  

將所有試劑平衡至25°C。使用前短暫離心試管。

計算：

從標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值中減去空白值（水，#6），并繪制ΔOD與標(biāo)準(zhǔn)品濃度的關(guān)系圖。使用非線性擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，例如二次多項式方程。從樣本孔的吸光度值中減去空白OD值。（如果使用了樣本空白，則從樣本中減去樣本空白的OD值。）使用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程確定樣本中GAG的濃度。如果樣本在檢測前進行了稀釋，則將結(jié)果乘以稀釋因子。

注意：如果計算出的濃度高于0.5 mg/mL，需將樣本用去離子水稀釋后重新檢測。將結(jié)果乘以稀釋因子。

所需材料（但未提供）：  

移液裝置及配件（例如多通道移液器）、透明平底96孔板（例如VWR貨號82050-760）、離心管和酶標(biāo)儀。如果需要固體樣本準(zhǔn)備：1X PBS（pH 7.4）、Dounce勻漿器、超聲儀、離心機。

示例：

左：透明質(zhì)酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。右：樣本按照協(xié)議處理并檢測。

文獻：

1. K?witsch A. et al (2018) Medical application of glycosaminoglycans: a review. J Tissue Eng Regen Med. 12(1):e23-e41.

2. Dong J. et al (2024) Metabolism mechanism of glycosaminoglycans by the gut microbiota: Bacteroides and lactic acid bacteria: A review. Carbohydr Polym. 332:121905.

3. Wieboldt R, L?ubli H. (2022) Glycosaminoglycans in cancer therapy.Am J Physiol Cell Physiol. 322(6):C1187-C1200. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。