DNA定量是分子生物學(xué)中常見(jiàn)的操作。很多時(shí)候，DNA的量非常少，而傳統(tǒng)的260 nm紫外吸收法需要微克級(jí)別的量才能獲得可靠的結(jié)果。在測(cè)序、克隆、轉(zhuǎn)染和DNA標(biāo)記等實(shí)驗(yàn)中，準(zhǔn)確測(cè)定低濃度DNA的濃度對(duì)于獲得可重復(fù)的結(jié)果至關(guān)重要。

用于測(cè)定DNA濃度的簡(jiǎn)單、直接且易于自動(dòng)化的操作流程是非常理想的。BioAssay Systems的QuantiFluo? DNA檢測(cè)試劑盒旨在準(zhǔn)確測(cè)量質(zhì)粒DNA、cDNA、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)后的DNA以及從凝膠中洗脫的DNA的納克級(jí)別含量。該改進(jìn)方法利用了能夠特異性結(jié)合雙鏈DNA的Hoechst染料。在450 nm（激發(fā)波長(zhǎng)為350 nm）處測(cè)量的熒光強(qiáng)度與樣本中的DNA濃度成正比。優(yōu)化的配方顯著減少了原始樣本中物質(zhì)的干擾。

作為BioAssay Systems在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷(xiāo)產(chǎn)品DNA測(cè)定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)

- 靈敏且準(zhǔn)確。在96孔板檢測(cè)中，小牛胸腺DNA的線(xiàn)性檢測(cè)范圍為2 ng至40 ng（100 - 2,000 ng/mL）。

- 簡(jiǎn)單且高通量。“混合-讀取”操作流程僅需加入一種工作試劑并讀取熒光強(qiáng)度。可以輕松自動(dòng)化為高通量檢測(cè)，每天可處理數(shù)千個(gè)樣本。

- 干擾低。RNA、鹽（高達(dá)3M NaCl）、洗滌劑（< 0.01% SDS）以及常見(jiàn)的DNA提取緩沖液不會(huì)對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生干擾。

應(yīng)用領(lǐng)域

- 直接檢測(cè)：質(zhì)粒DNA、基因組DNA、cDNA、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)后的DNA以及從凝膠和其他基質(zhì)中提取的DNA。

試劑盒組成（96孔板，250次檢測(cè)）

- 試劑：50 mL

- 標(biāo)準(zhǔn)品：1 mL（10 ug/mL小牛胸腺DNA）

儲(chǔ)存條件

- 試劑盒在室溫下運(yùn)輸。收到后，將DNA標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)存于-20°C，試劑儲(chǔ)存于2-8°C。有效期：收到后12個(gè)月。

- 注意事項(xiàng)：試劑僅供研究使用。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)注意事項(xiàng)。請(qǐng)參考材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細(xì)信息。

操作步驟

- 準(zhǔn)備：使用前將試劑恢復(fù)至室溫。

- 使用96孔板的操作步驟：

1. 將80 uL標(biāo)準(zhǔn)品與320 uL TE緩沖液（10 mM Tris，1 mM EDTA，pH 7.4）混合，制備400 uL 2000 ng/mL的預(yù)混液。按照以下方法稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。將20 uL稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本加入黑色平底96孔板的孔中。將標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)存于4°C以供后續(xù)使用。

2. 加入200 uL工作試劑，并輕輕敲擊以混合。

3. 在室溫下孵育1分鐘，并在440 - 460 nm（峰值450 nm，激發(fā)波長(zhǎng)為340 - 370 nm）處讀取熒光發(fā)射強(qiáng)度。

- 使用比色皿的操作步驟：

1. 將100 uL稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本轉(zhuǎn)移到比色皿中。

2. 加入1000 uL工作試劑，并輕輕敲擊以混合。

3. 在室溫下孵育1分鐘，并在440 - 460 nm（峰值450 nm，激發(fā)波長(zhǎng)為340 - 360 nm）處讀取熒光強(qiáng)度。

一般注意事項(xiàng)

1. 對(duì)于未知DNA濃度的樣本，取1 uL樣本與99 uL TE緩沖液混合。進(jìn)一步進(jìn)行10倍系列稀釋。對(duì)所有稀釋后的樣本進(jìn)行檢測(cè)，并選擇熒光強(qiáng)度值落在線(xiàn)性校準(zhǔn)范圍內(nèi)的稀釋度來(lái)計(jì)算樣本DNA濃度。

2. 小牛胸腺DNA作為植物和動(dòng)物DNA的標(biāo)準(zhǔn)品，因?yàn)檫@兩種生物的DNA中AT含量是保守的。對(duì)于細(xì)菌DNA，應(yīng)使用與樣本DNA含量最匹配的不同標(biāo)準(zhǔn)品。

3. 該染料與相同單鏈DNA結(jié)合時(shí)，熒光強(qiáng)度減半。短的單鏈DNA片段不會(huì)與該染料產(chǎn)生熒光。

示例：

96孔板測(cè)定中的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

文獻(xiàn)參考：

1. Labuzek K, et al (2010). Metformin has adenosinemonophosphate activated protein kinase (AMPK)-independent effects on LPS-stimulated rat primary microglial cultures. Pharmacol Rep. 62(5):827-48.

2. Mayer-Wagner S et al. (2010). Membrane-based cultures generate scaffold-free neocartilage in vitro: influence of growth factors. Tissue Eng Part A. 16(2):513-21.

3. Bhavnani B.R. et al. (2008). Structure activity relationships and differential interactions and functional activity of various equine estrogens mediated via estrogen receptors (ERs) ERalpha and ERbeta. Endocrinology. 149(10):4857-70. 

BioAssay Systems是一家位于美國(guó)北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專(zhuān)注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷(xiāo)售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類(lèi)齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開(kāi)發(fā)，以滿(mǎn)足生命科學(xué)行業(yè)日益增長(zhǎng)的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過(guò)50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了超過(guò)250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽(yáng)離子檢測(cè)。

作為BioAssay Systems在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶(hù)提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。