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通常將未知濃度樣品與陽性對照標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，可精確定量。每塊板都要帶標(biāo)準(zhǔn)（做平行或者三份）和空白對照以保證精確性。

用鼠抗體對鼠組織染色是個復(fù)雜的過程，因?yàn)槿菀讓?dǎo)致背景染色高，而且很難消除。 形成這種背景主要是由于組織染色時(shí)二抗與內(nèi)源性的鼠 IgG，或 B 細(xì)胞、漿細(xì)胞及巨噬細(xì)胞上的 Fc 受體結(jié)合造成的。

出于多種考慮，將小組織片段簡單浸泡在固定液中便能得到合適的固定，對大多數(shù)組織來說可能是唯一的固定模式。然而更快、更均一的固 定方法是將固定液通過管道系統(tǒng)如心主動脈或腹部主動脈灌注到組織中。下面介紹一下用 4% 多聚甲醛固定大鼠大多數(shù)器官的操作步驟。

固定就是保持抗原細(xì)胞和亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)固定不動，同時(shí)又能使抗體進(jìn)入到細(xì)胞和亞細(xì)胞的所有部位。固定和通透方法的選擇取決于抗原表位和 抗體本身的靈敏性，有時(shí)需要優(yōu)化。

關(guān)于免疫組織化學(xué)內(nèi)容，今天要介紹的是冷凍切片切割技術(shù)和免疫細(xì)胞化學(xué) (ICC) 指南的具體步驟。

免疫組織化學(xué) (IHC) 是確定組織切片上蛋白的存在與否及存在位置的一種方法。盡管這種方法在定量分析時(shí)靈敏度較免疫印跡法或 ELISA 等 免疫測定方法低，但是它能觀察到整個組織的情況。適用于評估癌癥等疾病的發(fā)展及治療情況。

無信號:一抗和二抗不匹配,二抗需和一抗宿主的物種相同（如一抗來自兔，二抗為抗兔抗體）。沒有足夠的一抗或二抗結(jié)合目標(biāo)蛋白

蛋白顯色的階段非常重要，可以知道蛋白遷移的是否均勻、平坦。如果分離后的蛋白需要轉(zhuǎn)膜，就用銅染，因?yàn)榭捡R斯藍(lán)染色是不可逆的。 考馬斯藍(lán)染色只用來檢測轉(zhuǎn)移的有效性，或者蛋白不需要轉(zhuǎn)膜時(shí)，只用于觀測蛋白 SDS-PAGE 分離的結(jié)果。

電泳可以是單相的（即一維分離）也可以是雙相的。單相電泳常用來進(jìn)行蛋白和核酸的分離，蛋白的雙相電泳用于指紋-識別（即總蛋白成分分析）和細(xì)胞里所有蛋白的精確定位。這里我們所描述的是單相電泳技術(shù)。

準(zhǔn)備凝膠電泳的樣品，需要對細(xì)胞和組織進(jìn)行裂解以釋放目的蛋白，這些可溶性蛋白能夠穿過分離膠單獨(dú)移動。裂解緩沖液有很多種，但用 來做 WB試驗(yàn)的僅有少數(shù)幾種。簡單來說，它們?nèi)芙獾鞍椎哪芰Σ煌惺榛蛩徕c和其他離子型去污劑的溶解能力最強(qiáng)。

由于其獨(dú)特的電子構(gòu)型，熒光物具有典型的吸收（激發(fā)）和發(fā)射光譜。

單一染色在特定波長被激發(fā)，在另外一個波長發(fā)射光子。

復(fù)合染色由距離非常近的、能量可以在彼此之間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復(fù)合染色在受體分子的激發(fā)波長

被激發(fā)，在 供體分子的發(fā)射波長發(fā)射一個光子

Abcam 網(wǎng)站有一個搜索功能。在搜索框中輸入蛋白或其它靶物質(zhì)的名稱，就會出現(xiàn)一個列表，可以通過產(chǎn)品類型、目的、實(shí)際用途、特異反應(yīng)性、宿主種類、克隆性和結(jié)合情況進(jìn)行篩選。